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TLR2活化对HBV持续复制的影响及其机制研究

作　者: 林永
导　师: 陆蒙吉
学　校: 华中科技大学
专　业: 病原生物学
关键词: 乙型肝炎病毒 Toll样受体2 天然免疫 HBV复制小鼠模型
分类号: R373.21
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：1.在HBV慢性复制小鼠模型中，探索TLR2活化能否抑制体内HBV复制。2.在HBV慢性复制小鼠模型中，探讨TLR2活化抑制HBV复制的机制。方法：1. TLR2配体Pam3CSK（P3C）小鼠尾根皮下注射。在不同时间点，定量ELISA检测小鼠血清中炎症因子：IL-6、TNF-α和IL-1β等的表达。2. C57BL/6小鼠高压尾静脉注射pAAV/HBV1.2质粒建立慢性HBV复制小鼠模型。在pAAV/HBV1.2质粒注射后的早期（day0, day7和day14）或晚期（day14, day21和day28），连续3次尾根皮下注射P3C处理小鼠。3.按既定实验设计对小鼠进行眼眶采血，并在固定时间点留取肝脾组织样本。通过定量ELISA检测小鼠血清炎症因子（IL-6、TNF-α和IL-1β等）和HBV血清标志物（如HBsAg、HBeAg）；用免疫组织化学方法检测肝组织中HBcAg的表达；用realtime PCR和real time RT-PCR分别检测血清中HBV DNA水平和肝组织相关分子mRNA的表达水平；用ELISPOT检测脾淋巴细胞中抗原特异性的分泌IFN-γ的细胞数；通过细胞内因子染色检测PBMCs和脾淋巴细胞中HBs/HBc peptide特异性的分泌IFN-γ的CD8+T细胞阳性百分率；用Dimer染色检测脾细胞中HBs/HBcpeptide特异性的CTLs情况。4.使用SPSS18.0对数据进行统计分析，使用GraphPad Prism5作图。结果：1. naive小鼠和HBV慢性复制小鼠经尾根皮下注射P3C后，血清中IL-6的产生在注射后3h达到最高，在24h内降至正常水平。并且，血清中IL-6的表达水平与P3C的处理剂量成正相关。2. HBV慢性复制小鼠经早期应用P3C后，血清中HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平明显降低，小鼠肝内HBcAg的表达也显著减少。而在P3C晚期处理小鼠中，未发现明显的抗HBV效应。3.在早期应用P3C组和未处理组的小鼠中，脾淋巴细胞和PBMCs均未能检测到HBV特异性的细胞免疫应答。仅在第10天，早期应用P3C组小鼠的脾淋巴细胞经rHBcAg刺激后分泌IFN-γ的T细胞数量少于对照组。4.通过对小鼠肝组织相关分子mRNA水平进行real time RT-PCR检测，我们发现：早期应用P3C组和对照组小鼠相比，IFN-β和IFN-γ mRNA无明显差异；促炎因子IL-6和TNF-α mRNA在第4天明显高于对照组；抑炎因子IL-10mRNA在第4天和第10天明显高于对照组。结论：1. naive小鼠和HBV慢性复制小鼠经TLR2配体P3C处理后，血清IL-6等炎症因子的产生是一个较快的过程，一般在几个小时内达到最高峰，且炎症因子的浓度与P3C的剂量成正相关。2.在慢性HBV复制小鼠模型中，早期应用P3C能发挥明显的抗HBV效应，而晚期应用则无此明显效应。3.在慢性HBV复制小鼠模型中，早期应用P3C产生明显的抗HBV效应的机制可能是通过TLR2介导的天然免疫应答对HBV的早期复制产生抑制，而TLR2活化诱导的特异性免疫应答在其中发挥的作用十分有限。

全文目录


中英文缩写名词对照表  6-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-12
前言  12-14
材料与方法  14-36
  1 材料  14-18
  2 方法  18-36
结果  36-48
  1. 构建 HBV 慢性复制小鼠模型  36
  2. P3C 处理后 naive 和 HBV 慢性复制小鼠血清中相关炎症因子的表达  36-38
  3. 早期应用 P3C 能明显降低小鼠血清 HBsAg、HBeAg 和 HBV DNA的水平  38-39
  4. 早期应用 P3C 能明显抑制 HBV 慢性复制小鼠肝内 HBcAg 的表达  39-40
  5. 早期应用 P3C 对 HBV 慢性复制小鼠 HBsAb、HBcAb 的产生无影响  40-41
  6. 早期应用 P3C 能短暂抑制 HBV 慢性复制小鼠的 T 细胞免疫应答  41-42
  7. 早期应用 P3C 对 HBV 慢性复制小鼠特异性的 CD8+ T 细胞应答无明显影响  42-45
  8. 早期应用 P3C 对慢性复制小鼠肝内细胞因子表达水平的影响  45-48
讨论  48-51
参考文献  51-55
综述  55-66
  参考文献  62-66
致谢  66-67
硕士期间发表论文情况及基金资助  67

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 人体病毒学（致病病毒） > 肠道病毒与肝炎病毒 > 传染性肝炎
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