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牛轮状病毒固相竞争ELISA及双抗体夹心ELISA方法的建立与应用

作　者: 张佳昕
导　师: 崔玉东；于力
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 兽医学
关键词: 固相竞争ELISA BRV抗体检测双抗体夹心ELISA BRV抗原检测
分类号: S852.653
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
下　载: 4次
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内容摘要

牛轮状病毒（Bovinerotavirus，BRV）是引起新生犊牛腹泻的主要病原之一，感染多发生在1月龄以内，引起腹泻的严重程度差别很大，包括无症状感染、温和的自限性腹泻以及伴有严重脱水和电解质失衡的重度腹泻。危害主要表现在饲料利用率下降、治疗成本增加、生长率的降低以及不同程度的死亡而造成的经济损失。为建立BRV感染牛血清抗体的固相竞争ELISA（SPCE）检测方法，本研究选取G6/G10共享型单克隆抗体（MAb）1F7为检测抗体，兔抗VP6多克隆抗体为包被抗体。结果表明：SPCE检测血清最佳稀释倍数为1:8，PI=40.32为反应的临界值。敏感性试验检测190份BRV抗体阳性血清，其中184份为阳性，敏感性为96.8%。SPCE与病毒中和试验（VNT）、间接ELISA、商品化试剂盒的符合率均高于97%。批内和批间重复试验的变异系数均小于9%，表明所建立的SPCE有良好的重复性。统计每次检测的阴、阳性对照血清的PI值，绘制质控图，监测试验中每次血清检测的准确性和可控性，结果表明检测结果准确可控。该方法的建立为BRV抗体的检测提供了有效的技术手段。为建立BRV的快速检测方法，本研究以兔抗VP6多克隆抗体为包被抗体、针对VP7蛋白的G6/G10型MAb1F7为检测抗体。敏感性试验结果显示，建立的ELISA方法最低可以检出104.2TCID50病毒。特异性试验结果显示，该ELISA方法与牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒、牛细小病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腹泻/粘膜病病毒以及阿卡斑病病毒均无交叉反应。组内和组间的变异系数均小于10%，表明重复性良好。符合性试验结果表明，该ELISA方法与RT-PCR方法、商品化试剂盒的符合率达100%。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法可用于BRV的规模化检测，为BRV的病原流行病学调查提供了技术手段。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
附录 A 英文缩略表  8-10
1 前言  10-26
  1.1 轮状病毒概述  10
  1.2 轮状病毒的基本特征  10-16
  1.3 轮状病毒感染及其危害  16-19
  1.4 轮状病感染的诊断  19-22
  1.5 牛轮状病毒感染的病原学、疫苗及诊断技术研究进展  22-24
  1.6 本研究的目的与意义  24-26
2 材料和方法  26-33
  2.1 实验材料  26-27
  2.2 试验方法  27-33
3 结果  33-44
  3.1 单克隆抗体的纯化及标记  33
  3.2 多克隆抗体的纯化  33
  3.3 牛轮状病毒抗体固相竞争ELISA检测方法的建立  33-40
  3.4 双抗体夹心 ELISA检测方法的建立与应用  40-44
4 讨论  44-49
  4.1 牛轮状病毒病原学及血清学诊断方法的研究现状  44-45
  4.2 以单克隆抗体为基础的轮状病毒抗原及抗体ELISA检测方法的优势  45
  4.3 固相竞争ELISA方法的建立与应用  45-47
  4.4 双抗体夹心ELISA方法的建立与应用  47-49
5 结论  49-50
参考文献  50-63
致谢  63-64
附录 B 各种培养液及溶液的配制  64-67
个人简历  67

牛轮状病毒固相竞争ELISA及双抗体夹心ELISA方法的建立与应用

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