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Ppp2ca基因的失活对雄性小鼠精子发生的影响及海马中特异性敲除Dicer1蛋白的小鼠的构建和表型

作　者: 唐超
导　师: 李建民
学　校: 南京医科大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 精子发生 Ppp2ca 不育 RNA酶ⅢDicer1 Frizzled9-CreERTM 海马死亡
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：精子发生是一个在时间和空间上受到高度调节的事件,从出生前的前精原细胞通过减数分裂和有丝分裂分化成为成熟的精子,包含了多种机制的共同调节。Ppp2ca是一种丝苏氨酸磷酸酶,它能与Shugoshin蛋白结合,共同调节有丝分裂和减数分裂的进程。本实验拟通过构建Ppp2ca条件型敲除小鼠,在雄性小鼠睾丸内敲除Ppp2ca基因,研究Ppp2ca的缺失对小鼠精子发生造成的影响。方法：构建Ppp2ca条件型敲除小鼠,并使用Ddx4-Cre转基因工具鼠和Ppp2ca条件型敲除小鼠通过两代的交配得到从胚胎期12.5天生殖细胞中开始缺失Ppp2ca基因的雄性小鼠。通过Western、睾丸组织切片、精子涂片和流式测DNA含量等实验,全面分析缺失Ppp2ca对小鼠精子发生的影响。结果：获得了基因型为;Ddx4-Cre;Ppp2caflox/-的小鼠,通过基因组PCR及Western的方法验证了Ppp2ca基因在这种突变小鼠睾丸中的缺失。在第4周、第5周和第8周分别检测小鼠睾丸重量和组织切片,发现睾丸与正常小鼠相比严重减轻,突变小鼠生精小管中几乎观察不到成熟的长形精子,并且出现了严重的空泡化以及染色体异常凝集等现象。通过流式测DNA含量发现,DNA含量异常的细胞大量增多,单倍体细胞减少；通过精子涂片发现,在5周和8周的小鼠睾丸中,几乎没有正常的精子出现；突变雄性小鼠生育力检测显示,与对照相比,突变小鼠完全不育。结论：在生殖细胞中敲除Ppp2ca会导致精子发生受阻,睾丸中生精小管空泡化严重,睾丸重量减少大于正常鼠的一半,引起雄性小鼠的不育。猜测可能是由于减数分裂、有丝分裂受阻所致,说明了Ppp2ca在雄性小鼠精子发生中起重要作用。目的：在小鼠海马中特异性敲除RNA酶Ⅲ酶(RNAase III enzyme) Dicer1,并初步观察Dicerl在小鼠海马的生长发育中起到的基本作用。方法：用在海马中特异性表达Cre酶的Frizzled9-CreERTM小鼠和Dicer1(flox/flox)小鼠交配,得到Dicer1(flox/+); Frizzled9-CreERTM小鼠,并再次与Dicer1(flox/flox)交配,得到Dicer1(flox/flox);Frizzled9-CreERTM小鼠,用他莫昔芬(TM)诱导Cre酶的表达,使Dicer1在海马中特异性敲除,观察小鼠的表型。结果：TM诱导的Dicer1全敲的小鼠出生率低,大部分在出生后40天左右死亡,海马中CA3区域变薄,猜测与海马中缺乏Dicer1酶有关。结论：Dicer1是miRNA产生过程中的重要因素,在海马中敲除Dicer1后影响小鼠发育,小鼠易猝死。

全文目录

第一部分小鼠睾丸中Ppp2ca基因的失活对精子形成的影响  5-51
  中文摘要  5-6
  Abstract  6-8
  引言  8-10
  材料与方法  10-33
  结果  33-44
  讨论  44-46
  结论  46-47
  参考文献  47-51
第二部分海马中特异性敲除Dicer1蛋白的小鼠的构建和表型  51-66
  中文摘要  51-52
  Abstract  52-53
  引言  53-55
  材料和方法  55-58
  结果  58-62
  讨论  62-63
  结论  63-64
  参考文献  64-66
综述  66-79
  参考文献  72-79
攻读学位期间发表文章情况  79-80
致谢  80

Ppp2ca基因的失活对雄性小鼠精子发生的影响及海马中特异性敲除Dicer1蛋白的小鼠的构建和表型

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