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FGF-2抵抗内质网应激诱导的细胞凋亡的机制研究

作　者: 皮振钧
导　师: 刘剑峰
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物物理学
关键词: 内质网应激细胞凋亡 FGF-2 肝癌 Nck
分类号: R363
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

随着环境的恶化和社会压力的增加,癌症、精神类疾病和神经退行性疾病成为危害人类健康的主要疾病,在对这些疾病的研究中,我们虽然取得了很大的进展,但是仍然有许多问题亟待解决,所以与癌症、精神类疾病和神经退行性疾病密切相关的细胞凋亡与抗凋亡的研究一直都是领域内研究的热点。在以往的研究中已经发现FGF-2是一种重要的多效因子,在相当多的研究报告都阐明了FGF-2与肿瘤和癌症细胞,特别是肝癌细胞的增殖、迁移,以及肿瘤和癌症细胞对化学药物和放射性治疗的抵抗作用有极为密切的关系。而随着对内质网应激研究的不断深入,研究也已经表明了一些与人类密切相关的疾病,神经退行性疾病(老年痴呆症、帕金森症),糖尿病,特别是癌症的发生、发展都与内质网应激有着密切的关系,其中一些机制已经得到了阐明,但是目前对真核细胞内质网应激的认识仍然有许多不清楚和有待解释的地方。针对FGF-2和内质网应激的研究成果都显示它们都与癌症和神经退行性疾病密切相关,那么FGF-2与内质网应激之间的关系到底是怎么样,其中的机制如何?以有的文献中没有深入的报道。我们的研究的目的就着眼于揭示FGF-2和内质网应激之间的关系,初步厘清其中的机制。本研究在前人研究的基础之上,着重研究了FGF-2(basic FGF)对于化学药物在肿瘤细胞上引起的通过内质网应激产生的凋亡的影响。本研究选择了一个常用的肿瘤细胞系肝细胞癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7作为研究材料,采用衣霉素(Tunicamycin/Tm)和毒胡萝卜素(Thapsigargin/Tg)来诱导其产生内质网应激,我们采用了放射性同位素摄入法、特异性的荧光染料染色和流式细胞法来检查各种不同的状态下HepG2和MCF-7细胞的情况,我们发现了FGF-2对肿瘤细胞HepG2和MCF-7的保护效应,我们采用了western blot的方法,检测了一系列与内质网应激相关的信号通路和关键蛋白的表达量和磷酸化水平变化,初步说明了这一保护效应相应的作用机理。我们还构建关键蛋白的高表达稳定细胞系,在此基础上检测了相关信号通路的变化,我们还采用了SiRNA技术对信号通路上的关键蛋白进行了know-down操作,由稳定细胞系以及SiRNA的结果我们确定了FGF-2对肿瘤细胞HepG2的保护效应中的关键蛋白,我们的研究展现了内质网应激反应信号通路与FGF-2之间的存在对话,通过对这种机制和细节的研究从而从一个方面阐明了内质网应激和FGF-2与肿瘤和疾病发生有着密切的关系,对于揭示癌症的发生发展过程的机理以及治疗有着重要的意义。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-7
主要符号和縮略词表  7-10
1 绪论  10-44
  1.1 研究背景  10-11
  1.2 FGF和FGFR  11-14
  1.3 FGF-2及其受体的结构与功能  14-22
  1.4 FGF-2相关的信号通路和信号蛋白  22-29
  1.5 内质网应激(ER STRESS)简介  29-41
  1.6 内质网应激和人类疾病  41-43
  1.7 总结  43-44
2 本研究研究方案和应用到的主要技术  44-50
  2.1 本研究中检测技术原理简介  44-48
  2.2 本研究的主要内容  48-50
3 实验设计、方法与结果  50-76
  3.1 引言  50-53
  3.2 材料和方法  53-56
  3.3 结果与分析  56-76
4 讨论与展望  76-86
  4.1 FGF-2可以保护癌细胞抵抗内质网应激诱导凋亡  79
  4.2 FGF-2降低与细胞凋亡相关的CHOP和PARP蛋白的激活  79-81
  4.3 ERK 1/2在FGF-2抵抗内质网诱导的凋亡中起了重要作用  81-82
  4.4 NCK-1是成纤维生长因子拮抗内质网应激诱导的凋亡的关键  82-84
  4.5 作用机制模式图  84-85
  4.6 展望  85-86
致谢  86-87
参考文献  87-100

FGF-2抵抗内质网应激诱导的细胞凋亡的机制研究

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