学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

金花茶体外抑制人低分化鼻咽癌细胞生长及VEGF-C\VEGFR-3的表达

作　者: 沈洁
导　师: 朱华
学　校: 桂林医学院
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 金花茶醇提物 人低分化鼻咽癌细胞 细胞周期 凋亡率 Caspase-3 VEGF-C\VEGFR-3
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 43次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的:金花茶(Camellia chrysantha (Hu) Tuyama,CCT)是一种具有极高药用价值的天然中草药。金花茶属无毒级天然药物,金花茶叶含有多种氨基酸、茶多酚、黄酮类等多种人体所需的有益成分[1-2],而且还富含对人体有重要的保健作用的微量元素。金花茶在降低血脂、血糖,防癌、抗癌等方面具有特殊功效。其抑制肿瘤的作用及机制已有初步探讨,研究发现金花茶在大鼠体内外均用明显的抑瘤作用[3]。但是对鼻咽癌细胞抑制作用的研究国内外未见相关报道。本实验通过观察金花茶醇提物体外对人低分化鼻咽癌株CNE- 2细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响以及淋巴管生成因子及受体VEGF-C\VEGFR-3蛋白表达的影响,为进一步研究发现金花茶抑制肿瘤细胞生长的机制奠定理论基础。方法:1.采用MTT法检测不同浓度(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)的金花茶醇提物在不同时间(24h、48h、72h)作用下对CNE-2细胞的体外增殖抑制效应。2.在倒置相差显微镜下观察不同浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)的金花茶醇提物作用CNE-2细胞后的细胞形态变化。3.利用hoechst33342染色在荧光显微镜下观察不同浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)的金花茶醇提物作用CNE-2细胞后的凋亡细胞形态。4.流式细胞术分析不同浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)的金花茶醇提物作用CNE-2细胞后的细胞周期变化及凋亡率。5.应用蛋白免疫印记技术(Western Blot)方法检测不同浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)的金花茶醇提物作用CNE-2细胞后细胞内Caspase-3蛋白表达的影响。6.酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)金花茶醇提物作用CNE-2细胞后的细胞上清液中淋巴管内皮因子及受体(VEGF-C\VEGFR-3)蛋白的表达变化。结果1.金花茶醇提物对CNE-2细胞具有生长增殖抑制作用,抑制效果有时间和剂量依赖性,随着时间的延长和浓度的增加,抑制效果逐渐增强。浓度大于50μg/ml的金花茶醇提物与阴性对照组相比,差异均有极显著性意义(p<0.01)。2.在倒置相差显微镜下观察随着药物浓度的升高,金花茶醇提物作用CNE-2细胞48h后,由生长停滞,逐渐使细胞皱缩变小、变圆,脱落,最后可见大量细胞收缩、破碎,脱落细胞悬浮于培养液中。3.在荧光显微镜下,不同浓度的金花茶醇提物作用CNE-2细胞48h后可观察到呈现致密浓染的强蓝色荧光,核固缩、核裂解,核染色质聚集的凋亡细胞形态,随着浓度的增高,凋亡细胞逐渐增多。4.金花茶醇提物作用CNE-2细胞48h后,随着浓度升高, G1期的细胞数比例增加,而G2、S期细胞比例均有不同程度的减少,细胞被阻滞于G1期。同时随着浓度升高,凋亡率也随之增高,与阴性对照组比较差异均有显著性意义(p<0.05)。5. Western Blot实验:随着药物浓度的增加,活化的Caspase-3蛋白条带逐渐加深,表达增强。用凝胶图像处理系统分析测定积分光密度值,与GAPDH条带和阴性对照组的积分光密度值比较差异均有统计学意义(p<0.05)。6. ELISA实验:随着药物浓度的增加,CNE-2细胞培育上清液中的VEGF-C \VEGFR-3蛋白表达水平下调。结论1.金花茶醇提物在体外能够抑制CNE-2细胞的增殖,且存在时效关系和量效关系。2.其抑制鼻咽癌细胞生长的作用机制可能是通过诱导G1期阻滞和Caspase-3蛋白表达的上调从而促进细胞的凋亡。3. ELISA试验表明了VEGF-C\VEGFR-3蛋白的表达有可能在人鼻咽癌转移的防治中发挥一定的作用。

全文目录


中文摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
英汉缩略词对照表  11-12
前言  12-16
1 材料与方法  16-33
  1.1 实验材料  16
  1.2 主要实验试剂  16
  1.3 主要实验仪器  16-17
  1.4 实验方法  17-33
2 结果  33-51
  2.1 噻唑蓝（MTT）比色试验  33-35
  2.2 金花茶醇提物抑制 CNE-2 细胞的形态变化（倒置显微镜）  35-37
  2.3 金花茶醇提物作用CNE-2 细胞凋亡的形态改变（荧光显微镜）  37-39
  2.4 流式细胞仪检测CNE-2 细胞周期及凋亡率  39-47
  2.5 Western Blot 法检测Caspase-3 蛋白的表达  47-49
  2.6 ELISA 法检测VEGF-C\VEGFR-3 蛋白的表达  49-51
3 讨论  51-60
4 结论  60-61
参考文献  61-66
综述  66-72
  参考文献  70-72
攻读学位期间发表的学术论文目录  72-73
致谢  73

相似论文

  1. 冬凌草甲素调控周期相关蛋白抑制SGC-7901细胞增殖作用的研究,R285
  2. Pin1在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞周期的影响,R738.1
  3. 血红素加氧酶介导盐诱导的番茄幼苗侧根发生及其与过氧化氢的关系,S641.2
  4. 血红素加氧酶/一氧化碳信号系统介导氯化钴诱导的番茄侧根发生,S641.2
  5. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,S828
  6. Cx-43、caspase-3、MMP-2在人粥样硬化冠状动脉内皮中的表达及意义的初步研究,R541.4
  7. PTEN、Caspase-7在胃癌与癌前病变中表达及意义,R735.2
  8. 大鼠再生肝脏细胞周期的研究,Q253
  9. 不同免疫方式对雏鸡免疫器官发育、细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响,S858.31
  10. 反式白藜芦醇对Aβ25-35致痴呆大鼠的保护作用及机制研究,R277.7
  11. 商陆皂苷甲对BXSB小鼠肾组织PCNA、Caspase-3、Fas和FasL表达的影响,R285.5
  12. 丹参酮ⅡA微乳抗H22小鼠肝癌的研究,R285.5
  13. 迟钝爱德华菌对大鲵的感染和死疫苗初次免疫保护作用,R392.1
  14. Caspase-3、Cx43在冠状动脉不同狭窄程度的心肌梗死病例中的表达及相关性研究,R542.22
  15. 急性肝衰竭小鼠肝组织内质网应激反应及Cyclin D1、HGF受体c-met表达和意义,R575.3
  16. 先天性肌性斜颈胸锁乳突肌中凋亡蛋白Caspase-4、Caspase-3的表达及术后随访分析,R726.8
  17. 温度影响体外培养大鼠精原细胞SCF/c-kit增殖通路及细胞周期,R698
  18. 全脑缺血再灌注大鼠海马CA1区Ngb与Caspase-3的相关性研究,R741
  19. 丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,R743.33
  20. 环氧化酶-2和细胞周期调节蛋白在食管鳞癌中的表达及相关性研究,R735.1
  21. 香菇C91-3发酵液蛋白分离纯化初步鉴定及其抗肿瘤机制的研究,R730.5

中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
© 2012 www.xueweilunwen.com