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aFGF对庆大霉素所致的海马星形胶质细胞损伤保护作用的体外实验研究

作　者: 刘春英
导　师: 黄巨恩
学　校: 广西医科大学
专　业: 护理学
关键词: 酸性成纤维细胞生长因子庆大霉素海马星形胶质细胞保护作用细胞培养
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：通过体外培养SD乳鼠海马星形胶质细胞的方法,探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)是否对庆大霉素(GM)引起的海马星形胶质细胞损伤有保护作用。方法：大鼠海马经分离、剪切、胰蛋白酶消化,进行星形胶质细胞的体外培养。采用兔抗GFAP多克隆抗体进行免疫组织化学染色鉴定,传3代细胞接种于接种于24孔板和96孔板内：(1)96孔板：培养24h后加入一系列浓度的aFGF(0.85、2.55、4.25、5.95μ g/L)作用24h,用MTT法检测细胞存活率；(2)96孔板：培养24h后加入一系列浓度的GM(1.2,1.6,2.0,2.4,2.8,3.2,3.6,4.0g/L),再培养24h后用MTT法检测细胞存活率；培养24h后在系列GM浓度的基础上加入一定浓度的aFGF,继续培养24h后用MTT法检测细胞存活率；并计算细胞抑制率、相应每组的GM的IC50值。(3)96孔板培养48h后随机分组：对照组(Control组)：正常培养；GM组：2g/L GM作用24h；aFGF(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)+GM组：分别加入0.85、2.55、4.25、5.95μg/L aFGF作用24h后再加2g/L GM培养24h。MTT法检测细胞存活率。(4)24孔板培养3d后用于实验。实验分3组：①对照组：正常培养；②GM组：2g/L GM作用24h；③aFGF+GM组：加入4.25μg/L aFGF24h后再加2g/L GM培养24h。每组设6个复孔,实验重复3次。观察细胞形态及MDA、NO含量和SOD、GSH-Px活性变化。结果：(1)形态学观察：对照组光镜下细胞形态多样,呈三极、多极型,折光性强,多数细胞突起相互交织成网状；GM组光镜下细胞大量皱缩,聚集成团,网状结构被破坏,突起连接中断,细胞质内出现较多的颗粒和空泡,电镜下可见细胞质浓缩,线粒体明显肿胀,细胞核膜凹陷,染色质边缘化凝集并裂解,出现较典型的细胞调亡征象；aFGF+GM组光镜下细胞皱缩程度减轻,聚集成团现象减少,突起连接中断不明显,细胞质内少见颗粒和空泡,电镜下可见细胞质密度基本正常,线粒体肿胀不明显,细胞核膜无明显凹陷,染色质分布均匀、边缘化凝集不明显。(2)在0.85-5.95μg/L范围内aFGF能够促进星形胶质细胞生长增殖；(3)同时加入aFGF处理24h能使GM(1.2～4.0g/L)对星形胶质细胞的半数抑制浓度(IC50)升高；(4)给予一定浓度的aFGF作用24h后,能使2.0g/L GM对星形胶质细胞的抑制率降低；(5)生化和酶学指标检测：GM组与对照组比较,SOD、GSH-Px酶活性下降,而MDA、NO升高(P<0.01),提示星形胶质细胞的培养和庆大霉素损伤的建模成功；aFGF+GM组与GM组比较,各生化和酶学指标差异均有统计学意义(P<0.01)。结论：aFGF对星形胶质细胞的生长具有一定的促增殖作用。aFGF对庆大霉素诱导的海马星形胶质细胞损伤具有一定的保护作用。aFGF对庆大霉素所造成的星形胶质细胞损伤的保护作用可能与其直接或间接拮抗自由基的产生,加强抗氧化酶对自由基的清除和保护抗氧化酶的活性有关。

全文目录

英文縮略词索引  4-5
摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
前言  10-12
材料与方法  12-28
结果  28-36
讨论  36-43
小结  43-44
参考文献  44-47
综述  47-56
  参考文献  53-56
致谢  56-57
硕士研究生期间发表的论文  57

aFGF对庆大霉素所致的海马星形胶质细胞损伤保护作用的体外实验研究

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