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N-乙酰半胱氨酸对氢醌抑制HL-60细胞分化以及2-Cys Peroxiredoxins表达的影响

作　者: 王春双
导　师: 李习艺
学　校: 广西医科大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: NAC HL-60细胞 细胞分化 活性氧 2-Cys Prxs
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl cysteine , NAC）是由L-半胱氨酸和乙酰基构成的，是一种含硫基的化合物，是细胞内半胱氨酸和谷胱甘肽的前体。最初应用于临床研究是在呼吸系统疾病中用于痰液溶解，随着临床研究的不断深入，发现NAC在艾滋病，癌症，药物及重金属中毒，心脏病以及吸烟损害等方面具有明显的保护作用，是一种具有研究价值的用途广泛的药物。HL-60细胞是人原髓细胞白血病细胞，其髓系祖细胞的特性比较明显，具有向多向分化的能力，在TPA诱导下可以向单核系分化，适合进行分化研究。Peroxiredoxins是近年来发现的抗氧化酶家族的成员，在生物体内广泛存在。2-Cys Prxs是其中的一个亚类，能够使细胞在氧化应激过程中免受氧自由基的损害，同时在细胞的分化与增殖过程中也发挥重要的作用。前期研究发现，在TPA诱导HL-60细胞分化过程中，HQ起到抑制作用，并且HQ能够上调PrxI、PrxIII的表达。本课题进一步探讨NAC在HQ抑制HL60分化过程中是否起到保护作用以及在此过程中2-Cys Prx基因表达的变化情况。【目的】研究N-乙酰半胱氨酸（NAC）在氢醌（HQ）抑制HL-60细胞向单核系分化过程中所起的作用，并探讨在此过程中2-Cys Prx基因表达的改变情况。【方法】HL-60细胞培养于IMDM培养液中,该培养液包含200 mL/L胎牛血清, 100 kU /L青霉素, 100 mg/L链霉素。在37℃，含有５%CO２的培养箱内传代培养。NAC1-10mmol/分别与HQ 50μmol /L和豆蔻酰佛波乙酯（TPA））20nmol/L共同处理细胞，在48h时收集细胞。通过硝基四氮唑蓝还原反应鉴定细胞分化；CCK-8检测细胞增殖；活性氧检测试剂盒鉴定活性氧的变化；Western blot检测2-CysPrxs蛋白表达的变化；荧光定量PCR检测2-Cys Prxs基因表达的变化。【结果】与HQ和TPA+HQ组比较，HL-60细胞增殖随NAC剂量的增加而增加，差异具有统计学意义(P<0.01)。在HL-60细胞向单核系分化的过程中，与TPA+HQ组比较，细胞的分化能力随着NAC浓度的增加而增强，差异具有统计学意义（P<0.01），其中NAC5mmol/L和NAC10mmol/L作用最为显著。活性氧检测结果显示，与空白对照组比较，HQ组和TPA+HQ组细胞内活性氧含量明显增强，差异有统计学意义（P<0.01）；与TPA+HQ组比较，NAC各个剂量组细胞内活性氧含量明显降低（P<0.01）。5个时间点测量细胞内活性氧含量存在显著性差异，F=564.3，P<0.01。在western-blot检测结果中显示，与空白对照组比较，HQ组和TPA+HQ组的2-Cys Prxs蛋白表达量明显增高，差异有统计学意义（p<0.01）；与TPA+HQ组比较，各个浓度的NAC的2-Cys Prxs蛋白表达量有降低的趋势，呈剂量依赖性，差异有统计学意义（p<0.01），在NAC浓度为1mmol/L时PrxⅣ蛋白表达差异没统计学意义（p>0.05）。在荧光定量PCR检测结果中，与空白对照组比较，HQ组和TPA+HQ组的2-Cys Prxs基因表达量有增高的趋势，差异有统计学意义（p<0.01）；与TPA+HQ组比较，各个浓度的NAC的2-Cys Prxs基因表达量均有降低的趋势，差异有统计学意义（p<0.01）。【结论】HQ能够抑制HL-60向单核系分化，这种抑制作用会随着NAC剂量的增加而降低，这种影响是通过清除细胞内活性氧来实现的。同时在HQ抑制HL-60细胞分化的过程中，NAC能够降低2-CysPrxs家族中PrxI~IV基因的表达和PrxIII、PrxⅣ蛋白的表达。

全文目录


英文缩略词表  4-5
摘要  5-8
ABSTRACT  8-12
前言  12-15
材料与方法  15-32
  1 实验材料  15-18
  2、实验方法  18-31
  3. 统计学处理  31-32
结果  32-41
  1 NAC 对 HL-60 细胞增殖的影响  32
  2 NAC 对 HL-60 细胞分化的影响  32-33
  3 NAC 对 HL-60 细胞 ROS 含量的影响  33-34
  4. NAC 对 HL-60 细胞的 2- Cys prxs 基因表达的影响  34-38
  5. NAC 对 HL-60 细胞的 2- Cys prxs 蛋白的表达的影响  38-41
讨论  41-45
参考文献  45-50
综述  50-64
  参考文献  57-64
致谢  64-65
发表的论文  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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