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甘氨酸对小鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

作 者: 张静
导 师: 陈琪
学 校: 南京医科大学
专 业: 病理生理学
关键词: 脑缺血再灌注损伤 甘氨酸受体 甘氨酸 凋亡
分类号: R965
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要


目的:探讨甘氨酸(Glycine,Gly)对小鼠脑缺血再灌注损伤中可能的神经保护作用,并阐明Gly对脑缺血再灌注损伤保护作用的可能机制,为进一步发掘甘氨酸的临床应用价值、防治脑缺血再灌注损伤提供新的思路和手段。方法:(1)采用右侧小鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)方法造成局灶性脑缺血,并在90min后移除栓线恢复灌注,建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型。实验动物分为“假手术组”、“手术+溶剂组(生理盐水)”、“手术+甘氨酸低剂量处理组”、“手术+甘氨酸高剂量处理组”,然后评价神经功能、用TTC染色估算脑缺血后脑梗死的体积、TUNEL染色检测梗死半影区神经元细胞凋亡数目。(2)提取梗死侧脑组织蛋白,Western blot检测脑组织中JNK磷酸化水平、cleaved caspase-3蛋白表达、bcl-2/bax的比值、FasL(Fas Ligand)的表达,RT-PCR检测bcl-2/bax、Fas、FasL mRNA水平的表达情况,从而阐明Gly拮抗小鼠脑缺血再灌注损伤的可能的信号通路。(3)在离体实验中,我们以SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)细胞系为实验对象,采用OGD(oxygen and glucose deprivation)缺氧-复氧模型在体外模拟神经元缺血再灌注损伤,MTT法检测细胞活力,并且甘氨酸实验组设计4个浓度:1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L;为了验证甘氨酸的细胞保护作用是否通过甘氨酸受体(GlyR),我们采用siRNA技术干扰了SH-SY5Y细胞系上的GlyR的表达,然后分别用MTT法检测OGD损伤后SH-SY5Y的细胞活力以及通过乳酸脱氢酶试剂盒检测细胞LDH释放率。我们还分离培养了小鼠原代神经元细胞,并且通过甘氨酸受体的抗体使神经元上GlyR封闭后进一步进行OGD实验,从而验证甘氨酸对脑缺血再灌注损伤的保护作用是否依赖于GlyR。结果:在体实验结果显示,与溶剂对照组相比,甘氨酸给药组明显减小了小鼠脑缺血再灌注损伤后脑梗死体积,改善了神经功能学评分。TUNEL染色结果显示梗死边缘区神经细胞凋亡数目明显减少,差异具有统计学意义。Western blot结果显示JNK磷酸化水平显著抑制,cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低。内源性凋亡通路上关键分子bcl-2/bax的比值显著增高,外源性凋亡通路上的关键分子Fas与FasL的表达则明显受到了抑制。离体实验结果表明,甘氨酸能够显著改善SH-SY5Y细胞以及原代神经元细胞OGD损伤后的细胞活力,抑制损伤后神经细胞的凋亡,并且甘氨酸的这一神经保护作用是通过甘氨酸受体途径介导所实现的。结论:甘氨酸可以改善小鼠脑缺血再灌注损伤后的神经功能,其作用可能由甘氨酸受体所介导,并通过抑制JNK的磷酸化水平,从而阻止脑缺血损伤后神经细胞的凋亡。

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
第一章 前言  9-14
第二章 材料和方法  14-22
第三章 结果  22-40
第四章 讨论  40-43
第五章 小结  43-44
参考文献  44-50
综述  50-62
  参考文献  56-62
致谢  62

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学 > 实验药理学
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