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全反式维甲酸对L0V0和SW480结直肠癌细胞系增殖、凋亡及维甲酸受体表达的影响

作　者: 徐升
导　师: 王鲁平
学　校: 安徽医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 微卫星稳定微卫星不稳定全反式维甲酸结直肠癌
分类号: R735.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

[背景与目的]结直肠癌（colorectal cancer，CRC）长期以来是肿瘤研究的热点之一。而以DNA微卫星重复序列长度改变为特征的微卫星不稳定型（microsatellite instability，MSI）CRC也越来越受到人们的关注。微卫星是指存在于人类基因组各部分的一组多次串联重复的DNA序列，以1-6个核苷酸为一个单位重复10-60次。该重复序列中包括5个核苷酸标记点，在这5个标记中，出现2个或者2个以上显示MSI则可诊断为高微卫星不稳定（microsatellite instable-high，MSI-H）；出现1个显示MSI则诊断为低微卫星不稳定（microsatellite instable-low， MSI-L）；5个标记点均没有显示MSI则可诊断为微卫星稳定（microsatellite stability，MSS）。MSS与MSI这两种特性的CRC提示着不同的发展趋势和愈后。维甲酸（retinoic acid， RA），是维生素A的衍生物，对多种肿瘤细胞有着抑制生长，促进凋亡，诱导分化等作用。RA有着包括9-顺式维甲酸、13-顺式维甲酸以及全反式维甲酸（all-trans retinoic acid， ATRA）在内的多种顺反异构体。其中以第三代维甲酸ATRA结构最为稳定。ATRA只有与维甲酸受体（retinoic acid receptorsRARs）结合才能有效地发挥其对肿瘤细胞抑制增殖、促进凋亡的作用。维甲酸受体包括RARs和维甲类X受体（retinoid X receptor, RXR）。RARs与RXR均参与RA信号的介导，并同样包括三种亚型α、β、γ。目前ATRA对CRC，尤其是MSSCRC和MSI CRC作用效果及差别并不明确。本文应用ATRA对MSI及MSS两种癌细胞进行不同浓度处理，并观察比较其增殖情况，RAR-α mRNA表达情况以及凋亡蛋白表达情况，以了解ATRA对MSI及MSS CRC的影响，为CRC发病机制研究及治疗方案的选择提供有益的科学依据，并间接了解ATRA对锯齿状病变发病机制的可能作用。[方法]体外培养MSI细胞LOVO及MSS细胞SW480，并用不同浓度的ATRA进行处理，同时设置阴性对照组和RARs-α抑制剂对照组。MTT法分析两种细胞增殖变化，RT-PCR及平均光密度比值分析RAR-α mRNA表达情况，Western-blot技术测定及平均光密度比值分析细胞凋亡蛋白caspase-3、caspase-8表达情况[结果]1.MTT检测发现两种细胞加入ATRA后生长受到明显抑制；并且浓度越高抑制效果越明显；而加入RARs-α抑制剂后ATRA抑制效果明显降低；2. RT-PCR检测RAR-α mRNA表达情况。加入ATRA之后，两种细胞RAR-α mRNA表达较阴性对照组均明显增加，差别有统计学意义（P<0.05）。SW480ATRA与LOVO ATRA比较差异有统计学意义（P<0.05），从平均光密度比值上看SW480细胞RAR-αmRNA表达高于LOVO细胞。而加入RARs抑制剂后两种细胞RAR-α mRNA表达较阴性对照组均无差别（P>0.05）3.Western-blot检测发现加入ATRA后两种细胞凋亡蛋白caspase-3、caspase-8表达均较阴性对照组明显增加，差别有统计学意义（P<0.05），而加入RARs抑制剂后两种细胞凋亡蛋白caspase-3、caspase-8表达较阴性对照组均无差别（P>0.05）。两种凋亡蛋白SW480ATRA与LOVO ATRA比较差异有统计学意义（P<0.05）。从平均光密度比值上看SW480细胞caspase-3、caspase-8表达均高于LOVO细胞。[结论]1. ATRA对MSS特性CRC细胞和MSI特性CRC细胞均能起到有效地抑制增殖、诱导凋亡和刺激受体表达作用2. ATRA对CRC细胞抑制增殖、诱导凋亡、促进RARs表达的作用效果比较，MSS细胞要强于MSI细胞3. RARs抑制剂能有效地抑制ATRA对肿瘤细胞的作用，说明ATRA只有与受体结合才能发挥作用。4ATRA对MSI及MSS癌细胞均具有抑制作用，应用ATRA受体抑制剂后抑制作用减弱，间接提示缺乏ATRA及维甲酸类物质可能与结直肠锯齿状病变发病有关。

全文目录

英文缩略词表  6-7
实验一全反式维甲酸对 LOVO 和 SW480 结直肠癌细胞系增殖、凋亡及维甲酸受体表达的影响  7-39
  摘要  7-9
  Abstract  9-12
  1 前言  12-13
  2 材料与方法  13-24
    2.1 实验材料  13-16
    2.2 实验方法  16-24
  3 结果  24-33
    3.1 细胞的形态学观察  24-26
    3.2 MTT 体外细胞增殖抑制试验  26-28
    3.3 RT－PCR 技术测定细胞 RAR-α mRNA 的表达  28-31
    3.4 Western-blot 技术测定细胞凋亡蛋白 Caspase-3、Caspase-8 表达  31-33
  4 讨论  33-36
  5 结论  36
  6 参考文献  36-39
实验二结直肠锯齿状病变伴浸润癌及高级别上皮内肿瘤的临床病理学观察  39-60
  摘要  39-41
  Abstract  41-44
  1 前言  44-45
  2 材料与方法  45-48
    2.1 研究材料  45-46
    2.2 实验方法  46-47
    2.3 结果判定  47
    2.4 统计学方法  47-48
  3 结果  48-54
    3.1 病理组织学观察  48-51
    3.2 临床特点观察  51-52
    3.3 免疫组织化学观察  52-54
  4 讨论  54-57
  5 结论  57
  6 参考文献  57-60
附录  60-61
  1 本人简历  60
  2 在学期间发表文章目录  60-61
致谢  61-62
综述Ⅰ 结直肠癌中的微卫星不稳定特性研究进展  62-69
  参考文献  66-69
综述Ⅱ 结直肠锯齿状腺癌研究进展  69-77
  参考文献  74-77

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