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Sonic hedgehog通路促进胃癌细胞生长与增殖的研究

作　者: 万建华
导　师: 崔红娟
学　校: 西南大学
专　业: 细胞生物学
关键词: Sonic hedgehog通路 环靶胺 胃癌 细胞周期 细胞存活
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 23次
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内容摘要


分泌信号蛋白的HH家族在从果蝇到人类这些多样化的动物门类的发展中起着一个重要作用,HH通路同样参与了成体组织中的干细胞增殖的调控,而且此通路的异常激活与多种人类癌症有关,自从果蝇中的HH通路被首次发现并被克隆之后已经取得了很多研究进展,许多HH通路相关的组件在果蝇中已经被鉴定和分析了,尽管如此,在脊椎动物中此通路仍有很多不解之处。在Hedgehog信号途径被发现与肿瘤的发生发展相关之前我们已经发现这一通路在哺乳动物的形态发生和胚胎发育过程中都扮演了一个十分重要的角色。其中在哺乳动物中就至少了发现三种同源基因：Sonic HH(SHH)、Desert HH(DHH)和Indian HH(IHH),它们均参与了胚胎发育、器官成熟及肿瘤形成。其中对SHH的研究最清楚,完整的SHH信号途径的相关蛋白分子包括：12跨膜的蛋白受体Patched(PTCH)、7跨膜的蛋白Smoothened(SMOH)、转录因子GLI以及胞质蛋白Fused和Fused抑制蛋白[Su(Fu)]。SHH信号途径的紊乱以及其信号相关成分的突变会导致肿瘤的发生与发展。所以加强对SHH信号途径的进一步了解,将有助于更好地调控SHH信号通路,深入了解细胞增殖与组织肿瘤之间的相互关系。目前的研究已经发现sonic hedgehog通路活性的异常激活与基底细胞癌、肺癌、前列腺癌、消化道肿瘤和口腔癌等的形成均有着重要关系,并发现其对很多肿瘤细胞的增殖,分化以及凋亡起着调控作用,所以说sonic hedgehog通路是一条在肿瘤中普遍存在的一条信号通路,尤其在最近几年越来越多的研究表明,soni c hedgehog信号通路的异常激活同样与胃癌的发生密切相关,在这项课题中我们主要以通过酶消化法获得的胃癌原代细胞GAM-016和胃癌细胞系MKN-45作为研究对象探索sonic hedgehog通路对胃癌细胞增殖及胃肿瘤生长的影响,并对其中的调控机制进行进一步的揭示,前期的研究结果表明当sonic hedgehog通路活性被药物cyclopamine抑制之后,胃癌细胞的生长增殖受到了很大的抑制,就是说sonic hedgehog通路可以促进细胞的生长增殖,接着在对其中的作用机制进行研究之后我们又发现sonic hedgehog通路能够调控胃癌细胞的细胞周期和存活：首先SHH通路的抑制导致细胞在细胞周期的G1期滞留,从而使得进入S期的细胞减少,其次,药物cyclopamine处理增加了细胞的死亡,我们知道细胞周期和死亡都受到相应的蛋白因子的直接调控,由此我们推测SHH通路可能是通过影响这些蛋白因子的表达水平从而间接的影响胃癌细胞周期和死亡；最后,我们建立了NOD/SCID小鼠胃癌的移植瘤模型来观察SHH通路对胃癌肿瘤生长的调控作用,实验发现,当通路被抑制之后胃癌肿瘤的生长也明显受到了抑制,这一结果对胃癌的临床治疗具有重要的指导意义,为以针对SHH通路的胃癌靶标治疗提供了进一步的理论依据。

全文目录


摘要  8-10
Abstract  10-12
文献综述  12-24
  1.1 Sonic hedgehog通路概述  12-18
    1.1.1 Sonic hedgehog通路的发现及功能  12
    1.1.2 Sonic hedgehog通路的构成和信号转导  12-15
    1.1.3 Sonic hedgehog通路的调控作用  15-18
  1.2 Sonic hedgehog通路与肿瘤  18-24
    1.2.1 Sonic hedgehog通路与肿瘤的形成  18-20
    1.2.2 Sonic hedgehog通路与胃癌  20-24
第二章 引言  24-28
  2.1 研究背景与目的意义  24-26
  2.2 技术路线  26-28
第三章 Sonic hedgehog通路相关蛋白在胃癌原代细胞的表达  28-34
  3.1 材料和试剂仪器  28-30
    3.1.1 实验材料  28
    3.1.2 实验试剂  28-29
    3.1.3 实验仪器  29-30
  3.2 实验方法  30-32
    3.2.1 细胞培养  30-31
    3.2.2 原代胃癌细胞GAM-016的制备  31
    3.2.3 细胞爬片  31
    3.2.4 免疫荧光  31-32
  3.3 结果与分析  32-34
第四章 Sonic hedgehog通路对胃癌细胞生长增殖的影响  34-42
  4.1 材料和试剂仪器  34-36
    4.1.1 实验材料  34
    4.1.2 实验试剂  34
    4.1.3 主要溶液配制  34-35
    4.1.4 实验仪器  35-36
  4.2 实验方法  36-38
    4.2.1 细胞计数  36
    4.2.2 生长曲线法(MTT法)  36-37
    4.2.3 BrdU标记  37-38
  4.3 结果和讨论  38-42
第五章 Sonic hedgehog通路对胃癌细胞周期和存活的影响  42-48
  5.1 材料和试剂仪器  42-43
    5.1.1 实验材料  42
    5.1.2 实验试剂  42
    5.1.3 实验仪器  42-43
  5.2 实验方法  43-44
    5.2.1 细胞周期检测  43-44
    5.2.2 Western-blot  44
    5.2.3 细胞存活率分析  44
  5.3 结果和讨论  44-48
第六章 Sonic hedgehog通路对胃癌生长的影响  48-52
  6.1 材料和试剂仪器  48-49
    6.1.1 实验材料  48
    6.1.2 实验试剂  48
    6.1.3 实验仪器  48-49
  6.2 实验方法  49-50
    6.2.1 胃癌原代细胞GAM-016皮下注射  49
    6.2.2 荷瘤鼠药物处理及生长观察  49-50
  6.3 结果和讨论  50-52
第七章 小结  52-54
参考文献  54-58
缩略词表  58-60
硕士在读期间发表的文章及参研课题情况  60-62
致谢  62-63

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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