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孕酮对大鼠脑缺血再灌注损伤神经保护作用的研究

作　者: 陈海波
导　师: 陈晓蓉
学　校: 安徽医科大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 孕激素脑缺血神经保护
分类号: R743
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

研究背景脑血管疾病（CVD）是神经系统的常见病和多发病，严重威胁着人类的生命健康。缺血性脑损伤可致选择性和迟发性的CA1区锥体神经元凋亡，导致动物和人类的神经功能缺失。大部分CVD存活者遗留不同程度的神经功能障碍，给社会和家庭带来沉重负担。女性在绝经期前发生脑卒中的风险较同龄男性低，但绝经后其脑卒中的发病率与同龄男性相仿，孕激素替代疗法可降低绝经期妇女脑卒中发生的风险，大量基础及临床实验证实，孕激素(PROG)具有神经保护作用。孕激素是一种甾体类固醇激素,由卵巢和肾上腺分泌，其神经保护作用机制包括经典的受体依赖机制和非受体依赖机制。其中，与靶器官中的孕激素受体结合是其在脑内最主要的作用途径，通常认为孕激素进入细胞后与其受体结合，受体蛋白发生构型变化后,与DNA的性激素作用元件结合，调节相关基因表达，产生不同效应。有实验表明，在全脑缺血模型中，孕激素可改善大鼠的神经功能缺失状况。然而，在临床上，局灶性脑缺血的发病率要远远大于全脑缺血，而且因缺血方式的差异，神经元的凋亡路径不同，其神经功能缺失状况也相差甚远。因此，研究孕激素在局灶性脑缺血模型中的神经保护作用及其机制，具有重要的理论意义和临床应用价值。研究目的本实验将健康成年SD雄性大鼠按随机化原则分组，阻断其单侧大脑中动脉后给予孕激素治疗，观察大鼠缺血后的神经功能评分、脑梗死面积比、PKCβⅡ和NF-κB p65的表达情况及IP3含量的变化情况，探讨孕酮的神经保护作用，并分析其可能机制。研究方法1、动物模型制备采用改良Longa法制作大脑中动脉闭塞模型，根据实验需要在一定的缺血时间（2h）后行拔线再灌注，以获得实验所需的MCAO模型。2、神经功能评分参照Zea Longa的评分方法，在处死大鼠前观察并记录神经功能缺失症状。3、TTC染色使用TTC染色的方面结合计算机图像分析软件计算梗死区脑组织的面积比例。4、免疫组织化学在形态学上观察PKCβⅡ和NF-κB p65表达的部位，对蛋白表达情况进行分析。5、酶联免疫吸附试验对各组大鼠脑组织中的IP3含量进行定量分析。6、统计学处理数据以均数±标准差（x±s）表示，多组样本均数的比较采用方差分析，两样本均数比较采用t检验。采用SPSS13.0统计软件分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。结果实验结果显示，给予孕酮(8mg/kg)治疗后大鼠脑梗死面积比例明显小于溶剂组；孕酮可改善雄性大鼠的神经功能缺失症状；溶剂组脑梗死侧的IP3含量显著低于假手术组和正常对照组，孕酮组脑梗死侧的IP3含量高于溶剂组；大鼠脑缺血24h时，PKCβⅡ和NF-κB p65的表达显著增加；孕酮处理情况下，PKCβⅡ和NF-κB p65的表达减少。实验结果提示，孕酮可能通过影响PKCβⅡ和NF-κB p65及IP3的表达实现其神经保护作用。

全文目录

英文缩略词表  5-7
摘要  7-9
ABSTRACT  9-12
1 引言  12-15
2 材料与方法  15-22
  2.1 实验动物及分组  15-16
  2.2 主要试剂及仪器  16-17
  2.3 大鼠 MCAO 模型建立  17-18
  2.4 给药途径与剂量  18
  2.5 神经功能评分  18
  2.6 脑组织的取材及TTC染色  18-19
  2.7 IP3的检测  19-20
  2.8 免疫组织化学  20-21
  2.9 统计学处理  21-22
3 结果  22-26
  3.1 孕酮对大鼠脑缺血再灌注后神经功能的影响  22
  3.2 TTC 染色部分  22-23
  3.3 IP3 含量变化  23-24
  3.4 PKCβⅡ和 NF-κBp65 的免疫组化结果及分析  24-26
4 讨论  26-29
5 结论  29
6 参考文献  29-33
附录  33-34
致谢  34-35
综述  35-51
  参考文献  45-51

孕酮对大鼠脑缺血再灌注损伤神经保护作用的研究

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