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中药补脑止痫散对癫痫大鼠海马c-fos、PKCa表达和谷氨酸、γ-氨基丁酸含量的影响

作　者: 董升平
导　师: 程为平
学　校: 黑龙江中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 补脑止痫散 c-fos PKCa 谷氨酸 γ-氨基丁酸
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的研究戊四氮致痫大鼠在使用补脑止痫散治疗前后一般状态、行为学海马组织病理学以及海马内c-fos、PKCa表达和谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)含量的变化情况,探讨补脑止痫散的抗痫机制,为该方的临床应用提供参考依据方法成年Wistar大鼠100只,随机选取10只作为空白组,其余90只用于癫痫模型点燃。点燃成功的大鼠随机平均分配到以下7组：模型组、补脑止痫散低、中、高剂量10天组以及低、中、高剂量21天组。在开始灌胃治疗的前1天以及疗程中的第10和21天观察相应组别大鼠的一般状态并称取体质量,记录痫性发作潜伏期和发作级别。HE染色观察海马组织病理学变化情况。免疫组化法检测海马c-fos、PKCa、Glu、GABA阳性细胞数,计算阳性细胞的平均灰度值；并计算Glu和GABA阳性细胞数的比值以及二者平均灰度值的比值。实验数据均输入SPSS17.0进行统计学处理,P<0.05为有显著差异,P<0.01为有极显著差异。结果共有70只大鼠成功点燃。灌胃过程中,低、中剂量10天组各死亡1只,模型组和中、高剂量21天组各死亡2只1一般状态和体质量变化情况模型组大鼠一般状态明显较空白组差,补脑止痫散各组与模型组相比均有改善,中、高剂量组好于低剂量组,21天组好于10天组。治疗前,模型组、补脑止痫散各组大鼠的体质量与空白组相比均明显变小(均为P<0.01)。治疗10天后,与模型组相比,低剂量组无显著变化(P>0.05),而中、高剂量组明显增加(均为P<0.01)。治疗21天后,补脑止痫散各组的体质量与模型组相比均明显增加(均为P<0.01)。2行为学观察空白组无痫性发作。灌胃前1天,模型组和补脑止痫散各组均可出现Racine4级或以上发作。治疗10天后,与模型组相比,低剂量组发作潜伏期无显著变化(P>0.05),但发作级别明显降低(P<0.05)；而中、高剂量组的发作潜伏期均明显延长,发作级别均明显降低(均为P<0.01)。治疗21天后,与模型组相比,补脑止痫散各组的发作潜伏期均明显延长,发作级别均明显降低(P<0.05或P<0.01)。3HE染色空白组大鼠海马细胞数量和结构均正常。模型组细胞数量明显减少,层次紊乱,细胞肿胀变形,胞浆染色加深,胞核固缩、碎裂。补脑止痫散各组较模型组均有改善,中、高剂量组的改善程度大于低剂量组,21天组大于10天组。4c-fos的表达情况空白组c-fos阳性细胞很少,平均灰度值最高,与之相比模型组阳性细胞数明显增多,平均灰度值明显降低(均为P<0.01)。与模型组相比,除低剂量10天组外,补脑止痫散各组阳性细胞数均明显减少,平均灰度值均明显升高(P<0.05或P<0.01)。无论是阳性细胞数还是平均灰度值,疗程相同的低、中、高剂量组之间两两比较均有极显著差异。剂量相同的10天组和21天组之间阳性细胞数均无显著差异,而平均灰度值均有显著差异。5PKCa的表达情况阳性细胞数方面,空白组很少,与之相比模型组明显增多(P<0.01)。与模型组相比,补脑止痫散各组均明显减少(P<0.05或P<0.01)。低、中高剂量10天组之间均有显著或极显著差异。低、中剂量21天组之间有极显著差异,中、高剂量21天组之间无显著差异。平均灰度值方面,模型组较空白组明显降低(P<0.01)。与模型组相比,除低剂量10天组外,补脑止痫散各组均明显升高(P<0.05或P<0.01)。疗程相同的低、中剂量组之间均有显著差异,中、高剂量组之间均无显著差异。无论是阳性细胞数还是平均灰度值,剂量相同的10天组和21天组之间均无显著差异6Glu和GABA的含量变化情况空白组Gl u阳性细胞数量最少,平均灰度值最高；GABA阳性细胞数量最多,平均灰度值最低。与之相比模型组Glu阳性细胞数明显增多,平均灰度值明显降低：GABA阳性细胞数明显减少,平均灰度值明显升高(均为P<0.01)。与模型组相比,除低剂量10天组外,补脑止痫散各组的Glu阳性细胞数均明显减少,平均灰度值均明显升高；GABA阳性细胞数均明显增多,平均灰度值均明显降低(P<0.05或P<0.01)。无论是Glu和GABA的阳性细胞数还是二者的平均灰度值,疗程相同的低、中剂量组之间均有显著或极显著差异,而中、高剂量组之间均无显著差异；剂量相同的10天组和21天组之间均无显著差异。根据秩均值,Glu和GABA阳性细胞数的比值在空白组最小,模型组最大。与模型组相比,补脑止痫散各组均明显变小,且高剂量组小于中剂量组,中剂量组小于低剂量组,21天组小于10天组。Glu和GABA平均灰度值的比值在各组之间的变化趋势与阳性细胞数的比值相反。结论1、补脑止痫散能明显改善癫痫大鼠的一般状态,纠正其体质量减轻的趋势；中、高剂量组作用强于低剂量组,21天组强于10天组。2、本方能明显延长癫痫大鼠的发作潜伏期,降低其痫性发作级别；中、高剂量组作用强于低剂量组,21天组略强于10天组。3、本方能明显减轻癫痫大鼠海马神经元的病理损伤；中、高剂量组作用强于低剂量组,21天组强于10天组。4、本方能明显抑制癫痫大鼠海马c-fos的表达；高剂量组作用最强中剂量组次之,低剂量组最弱,21天组略强于10天组5、本方能明显抑制癫痫大鼠海马PKCa的表达；中、高剂量组作用强十低剂量组,21天组与10天组相当。6、本方能降低癫痫大鼠海马G1u含量,提高GABA含量,纠正二者的失衡状态；中、高剂量组作用强于低剂量组,21天组略强于10天组。

全文目录

目录  2-6
摘要  6-9
Abstract  9-15
前言  15-16
综述  16-37
  1 现代医学对癫痫的研究进展  16-28
    1.1 病因  16
    1.2 发病机制  16-25
    1.3 现代医学对癫痫治疗的研究进展  25-28
  2 祖国传统医学对痫证的研究进展  28-37
    2.1 病名溯源  28
    2.2 病因病机  28-31
    2.3 痫证的症状  31
    2.4 痫证的治疗  31-37
实验研究  37-58
  1. 实验材料  37-38
    1.1 实验动物  37
    1.2 药品和试剂  37
    1.3 主要实验仪器和设备  37-38
  2. 实验方法  38-39
    2.1 癫痫模型点燃及分组  38
    2.2 灌胃治疗  38-39
    2.3 取材  39
  3 指标观测  39-41
    3.1 一般状态  39
    3.2 行为学观察  39
    3.3 病理学观察  39-40
    3.4 海马组织免疫组化染色  40-41
  4 统计学分析  41
  5 结果  41-58
    5.1 一般状态  41-43
    5.2 行为学观察  43-48
    5.3 HE染色结果  48
    5.4 c-fos表达情况  48-50
    5.5 PKC a表达情况  50-52
    5.6 Glu含量  52-54
    5.7 GABA含量  54-56
    5.8 Glu、GABA阳性细胞数的比值和二者平均灰度值的比值  56-58
讨论  58-72
  1 关于补脑止痫散的组方原则  58-61
  2 关于癫痫模型和实验分组  61-63
  3 关于实验结果  63-71
  4 本实验的不足之处  71-72
结论  72-73
致谢  73-74
参考文献  74-82
附图  82-89
攻读博士学位期间发表的论文  89-91
个人简历  91-103

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