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肿瘤转移抑制因子CD82对人滋养层细胞分化的调控及其分子机理研究

作　者: 张倩
导　师: 谭毅
学　校: 重庆医科大学
专　业: 生物医学工程
关键词: 肿瘤转移抑制因子CD82 侵润/迁移滋养层细胞 HTR8/SVneo
分类号: R714.2
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

背景：胎盘滋养层细胞在哺乳动物胚胎植入和胎盘发生过程中具有十分重要的作用。在人类早期妊娠进程中，滋养层细胞对母体子宫壁的适度侵润是胎盘形成的关键环节，胎盘滋养层细胞的分化受到多种分子如生长因子、细胞因子和激素的调控，其调控异常会导致多种妊娠相关疾病的发生，如自发流产、绒毛膜癌、子痫前期和胎儿生长受限等。肿瘤转移抑制因子CD82在抑制肿瘤细胞的侵润迁移上起着重要的作用。而且，滋养层细胞的侵入特性与肿瘤细胞的侵袭特性十分相似。我们实验室前期的研究表明肿瘤转移抑制基因CD82在妊娠前期小鼠子宫中呈现规律表达。但是，CD82基因在人胎盘滋养层细胞分化中的功能和相关分子机理尚不明确。目的：研究肿瘤转移抑制因子CD82在调控人滋养层细胞细胞侵润迁移中的作用以及发挥作用的相关分子机制。方法：1.免疫组化技术检测CD82在人妊娠不同时期滋养层细胞中的表达位置。2.采用基因工程技术，构建含CD82全长基因的Flag-CMV4质粒，用于细胞转染，过表达CD82基因。3.筛选具有CD82干扰效率的siRNA片段，用于细胞转染，干扰CD82表达。4.利用早期绒毛外植体培养的方法研究CD82对绒毛外滋养层细胞迁移的影响。5.运用Matrigel细胞侵润模型和Transwell细胞迁移模型检测过表达和干扰CD82对HTR8/SVneo细胞侵润和迁移能力的影响。6.收集细胞转染上清，明胶酶谱检测MMPs的表达，蛋白免疫印迹检测MMPs的组织抑制因子TIMP-1和-2的表达。结果：1. CD82在人妊娠早期胎盘绒毛主要定位于细胞滋养层柱（TC）和合体滋养层，足月侵润到母体蜕膜组织的绒毛外滋养层细胞中也有CD82的表达。在正常的滋养层细胞系中CD82高表达。2. CD82全长质粒可以过表达CD82； siRNA片段可以降调CD82的表达。3.CD82siRNA促进早期绒毛外植体绒毛外滋养层细胞的迁移。4.Matrigel细胞侵润模型和Transwell细胞迁移模型显示CD82siRNA显著促进HTR8/SVneo细胞（侵润型绒毛外滋养层细胞系）的侵润和迁移，相反，过表达CD82可抑制该细胞的侵润和迁移能力。5. CD82抑制滋养层细胞的侵润可能是通过降调酶原型基质金属蛋白酶MMP-9和促进MMPs的组织抑制因子TIMP-1和-2的表达实现的。结论：综合以上研究，我们发现肿瘤转移抑制因子CD82在人滋养层发育过程中的关键基因，在调控滋养层细胞正常侵润迁移能力中具有重要作用。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
摘要  7-9
ABSTRACT  9-12
前言  12-14
第一部分 CD82/KAI1 在人胎盘绒毛及不同滋养层细胞系的表达  14-23
  1 材料和方法  14-19
  2 实验结果  19-23
第二部分 CD82 全长质粒的构建及干扰片段的筛选  23-31
  1 材料和方法  23-28
  2 实验结果  28-31
第三部分 CD82 对人滋养层细胞侵润和迁移的调控  31-48
  1 材料和方法  31-34
  2 实验结果  34-35
  3 讨论  35-48
全文总结  48-49
主要实验仪器  49-50
主要实验试剂  50-51
文献综述  51-79
参考文献  79-96
致谢  96-97
攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录  97-98

肿瘤转移抑制因子CD82对人滋养层细胞分化的调控及其分子机理研究

内容摘要

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