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脱细胞羊膜对兔同种异体跟腱移植后粘连的预防作用

作　者: 董瑞一
导　师: 田德虎
学　校: 河北医科大学
专　业: 外科学
关键词: 羊膜跟腱缺损同种异体移植跟腱粘连兔
分类号: R687.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：肌腱损伤是手外科领域较为常见的疾病，且多为多发性损伤，常需要肌腱移植修复缺损。同种异体肌腱来源充足，不会对患者造成副损伤，是理想的移植材料。然而同种异体肌腱移植后容易发生粘连，进而影响功能的恢复，因此解决同种异体肌腱移植术后粘连是非常迫切的问题。羊膜光滑、透明、柔软可塑性好，不含有血管及淋巴管，不产生排异反应；移植后可以形成连续性胶原薄垫植片，成为抑制粘连的机械性屏障；还可使炎症细胞凋亡、对营养物质具有良好的通透性，能够减轻炎性反应促进肌腱愈合。本实验应用羊膜包裹在同种异体跟腱周围，移植修复新西兰白兔跟腱缺损，评价其预防肌腱粘连及促进肌腱愈合的有效性，为临床同种异体肌腱的移植及粘连的预防提供理论依据。方法：选用3月龄健康雄性新西兰大耳白兔30只，平均体重2.25±0.05kg。编号后随机分为实验组(羊膜包裹同种异体肌腱组)和对照组(同种异体肌腱组)。实验动物给予速眠新(2ml/kg)行肌肉注射麻醉，常规备皮、消毒、铺巾，驱血，大腿中部束橡皮条止血带。于双侧跟腱边缘纵向切开皮肤、皮下组织，解剖分离跟腱，在跟骨附着点上方1.0cm处切取1.5cm长跟腱，制备跟腱缺损模型。两组切取的跟腱一对一互换，在手术显微镜下采用3-0肌腱线行改良Kessler缝合，实验组15只动物的跟腱移植处植入羊膜小片，环形包绕移植跟腱及其上下吻合端，最后缝合皮肤。对照组15只动物的移植跟腱不包裹羊膜，其余处理均同实验组。无菌敷料包扎切口，石膏屈膝、趾屈位固定，每隔3天切口局部75%酒精消毒，给予被动活动膝关节及踝关节，防止关节僵硬。术后12天拆线，21天后去除外固定自由活动。术后每日予青霉素(4ug/kg)肌注，预防感染5天。大体观察：于术后2周、4周在两组各取2只实验动物，处死后立即沿原手术切口入路，观察移植跟腱的色泽、愈合及粘连的情况。组织学观察：于术后2周、4周大体观察后，以跟腱吻合口为中心切取长1cm的跟腱段。固定，脱水，包埋、切片，厚度为5μm，分别进行HE和Masson染色。HE染色切片于光镜下观察跟腱周组织充血、水肿情况，跟腱断端愈合情况及与周围组织粘连程度；Masson染色切片观察跟腱胶原纤维排列状况。透射电镜观察：于术后2周、4周大体观察后，从跟腱吻合口处切取大小为1mm×1mm×1mm组织块，包埋，切片，透射电镜观察细胞质和细胞核的变化情况。流式细胞学检测：分别于术后2、4、6周，每组取5只实验动物，于耳缘静脉采血1ml至EDTA-K2抗凝管中，行外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞计数检测。以反映免疫排斥反应的程度。生物力学测定：分别于术后2、4、6周每组取4只动物处死后，切取双侧小腿及足部行生物力学测试。①拉断跟腱粘连带功耗(W0)测定：分别将跟腱及胫骨固定在试验机夹具上进行牵拉，拉伸速度为15mm/min，满载荷量程设定为100N。跟腱滑动16.0mm后停止，得到拉力-位移曲线，曲线下的面积为功耗W1。将标本恢复原状，各项条件不变，再次牵拉16.0mm，同理得到功耗W2。拉断跟腱粘连带功耗(W0)：W0=W1－W2。②跟腱最大抗拉伸断裂强度(Pmax)的测定：取出跟腱段，固定于生物力学试验机夹具上，满载荷量程设定为100N，以15mm/min的拉伸速度进行牵拉至跟腱自任一吻合口处断裂，电脑运行测定程序并与试验机相连，同步测量并记录跟腱最大抗拉伸断裂强度(Pmax)。羟脯氨酸含量测定：分别于术后2、4、6周力学实验后，取动物移植跟腱的新鲜腱段标本，经生理盐水清洗、ELISA法检测跟腱愈合过程中的羟脯氨酸(Hyp)含量。结果：①大体观察：两组跟腱周围均充血、水肿，且随时间延长而缓解，实验组跟腱表面光滑，可见疏松粘连带，对照组跟腱表面不光滑为广泛致密纤维组织粘连带。②组织学观察显示，术后2、4周实验组炎性反应和浸润范围均较对照组局限且胶原纤维排列较整齐。③透射电镜观察显示，术后2、4周，实验组成纤维细胞核大，粗面内质网丰富，新生的胶原纤维排列整齐、粗大，对照组内质网少，且内容物少。④流式细胞学检测：术后2、4、6周，实验组CD4+、CD8+T淋巴细胞计数及CD4+/CD8+T淋巴细胞比值均低于对照组；差异有统计学意义(P<0.05)。⑤生物力学测定：术后2、4、6周各时间点，实验组跟腱最大拉伸断裂强度均大于对照组；而拉断粘连带功耗小于对照组；差异均具有统计学意义(P<0.05)；⑥羟脯氨酸(Hyp)含量，术后2、4、6周各时间点，实验组跟腱羟脯氨酸(Hyp)含量均大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：羊膜做为一种移植材料，一方面可以有效的阻止腱周结缔组织的侵入，抑制了外源性愈合的发生，达到了预防粘连的目的；另一方面羊膜对营养物质有良好的通透性，还能分泌细胞生长和免疫抑制因子，不但减轻了移植肌腱的炎性反应，而且促进了肌腱本身的内源性愈合。此外羊膜内无血管、神经及淋巴，不会产生免疫排斥反应，并且可以在体内吸收，为临床肌腱移植、预防术后粘连的研究提供了一个新的方向。

脱细胞羊膜对兔同种异体跟腱移植后粘连的预防作用

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