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自聚肽承载的脂肪源性干细胞移植修复急性心肌损伤

作　者: 揭领军
导　师: 王挹青
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科学
关键词: 自聚肽脂肪源性干细胞心肌梗塞心肌修复
分类号: R654.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：观察自聚肽承载脂肪干细胞移植到急性心梗大鼠后对心肌的修复作用。方法：采用zuk[1]方法提取并改进提取脂肪源性干细胞，培养养并且鉴定其表面标志物。通过结扎大鼠的冠脉左前降支（LAD）建立急性心梗模型，模型成功后，40只SD大鼠分为PBS组，自聚肽组，干细胞组，自聚肽承载干细胞组.每组8只。在脂肪源性干细胞组，107脂肪干细胞悬浮于100ulPBS中，冠状动脉结扎后30min用胰岛素针在梗死周边分4点。在心梗组和自聚肽组加注射等量的PBS和SAP悬液.在自聚肽承载干细胞组，100ul自聚肽悬液重悬干细胞注射。移植2week后行心脏彩超观察心脏功能的恢复。后取心脏标本行石蜡切片行Masson染色，OCT包埋、连续切片行VWF, a-SMA，vimentin免疫荧光检测。结果和结论：细胞分离得到原代ADSCs，光镜观察细胞形态呈纺锤体样的形态，随着不断培养，其形态也发生了变化。流式细胞术检测分离细胞表达CD29、CD44，不表达CD106和CD45.细胞，脂肪干细胞诱导可表达a-SMA，vwf，vimentin，通过油红O染色证明其可以向脂肪细胞转化。DiI标记ADSCs。自聚肽承载干细胞与单纯干细胞相比，前者体内有更多的细胞截留。心梗后2week心脏彩超显示：治疗组的EF（%）和FS（%)值比较PBS组(37.3±8.3%and15.7%±4.1%）均有明显的改善。联合治疗组(71.2±6.2%and36.0±4.6%)比干细胞(49.9±9.7%and22.38±5.30%)或自聚肽组(47.6±9.9%and23.2±6.70%)更有效的提高了心脏功能。马森三色染色显示，联合治疗组的纤维渗出率明显小于干细胞或自聚肽组。免疫荧光显示：与细胞组和自聚肽组比较，联合治疗组的血管密度密度更高。以上结果证明：自聚肽承载的脂肪源性干细胞移植不仅可以改善急性心梗后心肌修复，而且还能减少纤维渗出和提高血管新生。

全文目录

主要英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
引言  9-10
1：材料与方法  10-13
2 实验方法  13-22
  2.1 ADSCs 的培养、筛选与鉴定  13-14
  2.2 大鼠 ADSCs 生长情况的评价  14
  2.3 大鼠 ADSC 的冷冻与复苏  14-15
  2.4 大鼠 ADSCs 的标记  15
  2.5 大鼠 ADSCs 诱导多向分化能力  15-17
    2.5.1 脂肪诱导与油红 O 染色  15-16
    2.5.2 vementin 诱导  16-17
    2.5.3 aSMA 分化  17
  2.6 大鼠 ADSCs 在自聚肽培养  17
  2.7 大鼠心肌模型的建立和动物分组  17-18
  2.8 自聚肽的合成  18
  2.9 移植 2 周后心功能的测定  18-19
  2.10 病理检测  19-21
    2.10.1 切片制备  19-20
    2.10.2 HE 染色  20
    2.10.3 Masson 染色检测梗塞面积  20-21
    2.10.4 微血管密度  21
  2.11 移植细胞截留率  21-22
  2.12 移植细胞向心肌分化  22
3 统计方法  22-23
4 实验结果  23-30
  4.1 AMI 模型建立  23
  4.2 ADSCs 细胞的生物学特征  23-24
  4.3 ADSC 流式鉴定和免疫荧光  24-25
  4.4 ADSCs 的标记  25
  4.5 ADSCs 在 SAP 中培养  25-26
  4.6 心脏彩超  26
  4.7 HE 和 Masson 梗塞面积测定  26-27
  4.8 血管密度  27-28
  4.9 移植细胞截留率和在心肌内心肌转化  28-30
讨论  30-33
结论  33-34
参考文献  34-39
致谢  39-40
综述  40-49
  参考文献  46-49

自聚肽承载的脂肪源性干细胞移植修复急性心肌损伤

内容摘要

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