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周期联合甲氨蝶呤、来氟米特和环磷酰胺治疗逆转CIA大鼠 MRP1表达的研究

作　者: 王晓丽
导　师: 李小峰
学　校: 山西医科大学
专　业: 风湿免疫学
关键词: 类风湿关节炎联合治疗多药耐药蛋白耐药性
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

背景类风湿关节炎(Rheumatoidarthritis,RA)是一种高度致残性的慢性自身免疫性疾病，使用改变病情抗风湿药(diseasemodifyinganti-rheumaticdrugs,DMARDs)是治疗RA的重要策略，可明显降低致残率。然而在应用DMARDs治疗过程中会出现一个重要现象是药物疗效逐渐减弱，细胞的耐药性可能起着重要的作用。RA中刚认识耐药的重要性，而在肿瘤和感染性疾病的治疗中研究较多。多药耐药的发生是多种耐药蛋白共同参与的结果，其中多药耐药蛋白1（multidrugresistancepro-tein，MRP1）就是重要的耐药分子之一。我们通过10余年的临床及基础研究已证实周期特异性药物（来氟米特leflunomide，LEF、甲氨蝶呤methotrexate，MTX）联合周期非特异性药物环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）有协同效应。本研究进行了动物实验研究，建立胶原诱导性关节炎模型（collageninducedarthritis,CIA），验证周期特异性药物联合周期非特异性药物是否逆转耐药；进一步从耐药分子MRP1的角度进行协同效应机制的研究，周期特异性药物对抑制MRP1是否存在协同效应。目的1.研究CIA大鼠和应用DMARDs药物治疗后各组大鼠脾脏淋巴细胞中MRP1表达的差异；2.探讨周期联合MTX、LEF、CTX在影响CIA大鼠脾脏淋巴细胞MRP1的表达方面的协同效应机制。3.探讨影响CIA大鼠脾脏淋巴细胞MRP1表达的相关因素；方法本研究选取SD大鼠80只，建立Ⅱ型胶原诱导的雌性SD大鼠CIA模型，随机分为空白对照组、造模对照组、单药组（LEF组、MTX组、CTX组）、联合治疗组（MTX+LEF组、MTX+CTX组、LEF+CTX组），每组10只。进行9周动物实验，初次免疫后3周开始给药。在给药过程中连续对大鼠的关节炎症程度进行评分，游标卡尺测量双后肢的足肿胀度。治疗6周后全部动物处死取材，再经固定、脱钙、包埋，制成切片。然后各组大鼠行HE染色观察踝关节滑膜的组织病理学改变。进一步通过流式细胞仪测定各治疗组脾脏淋巴细胞MRP1的表达，其表达情况用平均荧光强度(meanrelativefluorescenceintensity,MFI)值表示，比较各个组间的MFI值，进行统计分析。结果1.CIA大鼠造模成功率达92.3%（72/78）。症状、影像学、病理评估均证实造模成功，该模型为慢性关节炎。2.关节炎指数（arthritisindex，AI）：单药（MTX、LEF、CTX）和联合治疗（MTX+CTX、MTX+LEF、LEF+CTX）组AI均较模型组有明显改善，联合治疗组优于单药组（P＜0.05），各联合治疗组之间及各单药组之间差异无统计学意义（P＞0.05）；联合治疗组足肿胀度改善明显，与CIA组及单药组间差异具有统计学意义（P＜0.05），各联合治疗组间差异无统计学意义。3.HE关节病理改变：各治疗组与造模组间差异具有统计学意义，LEF+CTX、MTX+CTX与MTX+LEF、单药组间差异有统计学意义。4.CIA大鼠脾脏淋巴细胞MRP1的表达：单药组与造模组间平均荧光强度差异无统计学意义；单药治疗组三组间平均荧光强度比较差别无统计学意义；造模组与联合治疗组间MRP1表达的平均荧光强度差异有统计学意义，单药组与联合治疗组间差异有统计学意义，联合组明显优于单药治疗组；但联合治疗组间MRP1的平均荧光强度差异无统计学意义。采用析因设计分析三组联合治疗对MRP1影响并无交互作用。提示三组联合治疗并无协同作用。5.CIA大鼠MRP1表达的平均荧光强度与足肿胀度和TNF-a相关性：造模组大鼠MRP1表达的MFI值与足肿胀度和TNF-a间均有相关性，差异有统计学意义。结论1.联合用药较单用药组MRP1的表达降低，证实联合治疗一定程度上逆转MRP1的表达。2.MTX、LEF和CTX两两联合对淋巴细胞MRP1影响并无交互作用。3.CIA大鼠脾淋巴细胞MRP1的表达与疾病活动平行，其表达可能与DMARDs药物疗效下降有关；

全文目录

英文缩略词表  5-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-11
前言  11-13
第一部分胶原诱导关节炎动物模型的建立  13-20
  材料与方法  13-16
  实验结果  16-19
  结论  19-20
第二部分周期联合MTX、LEF和CTX治疗CIA大鼠疗效比较以及对MRP表达及逆转的影响  20-45
  材料与方法  20-27
  实验结果  27-40
  讨论  40-44
  结论  44-45
参考文献  45-48
综述  48-53
  参考文献  51-53
附图  53-57
个人简介  57-58
致谢  58

周期联合甲氨蝶呤、来氟米特和环磷酰胺治疗逆转CIA大鼠 MRP1表达的研究

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