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疏肝健脾固髓方治疗多发性硬化的临床及机制的初步研究

作　者: 杨帆
导　师: 李涛
学　校: 中国中医科学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: 多发性硬化 T细胞亚群 EAE 疏肝健脾固髓方
分类号: R285
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：研究多发性硬化患者外周血T细胞亚群的变化规律,探讨T细胞亚群作为多发性硬化病情变化指标和治疗依据的可能性。通过EAE模型探讨疏肝健脾固髓方治疗多发性硬化的机制。方法：将MS患者按照疾病分期进行分类,统计各病期外周血T细胞亚群的变化。运用聚类分析,探讨多发性硬化的证候特点。疏肝健脾固髓方治疗多发性硬化动物模型后检测其外周血炎症细胞因子蛋白的表达情况并观察病理改变。结果：1.临床研究1.1多发性硬化病人在激素治疗期的CD4+T细胞亚群与病程发病早期、激素影响期、稳定期相比比例增高,差异有显著意义(P<0.05)；激素治疗后CD3+CD19-T细胞与激素治疗期相比比例降低,差异有显著意义(P<0.05)。其余各T细胞亚群在各病期的比较均无显著性差异(P>0.05)。1.2临床症状研究中大部分病人中均有不同程度的肝郁脾虚证候特点,如情绪低落(50.8%)、两胁不适(22.2%)、胸闷(31.7%)、心烦(41.3%)、神疲乏力(65.1%)、纳少(28.6%)、恶心(12.7%)、呃逆(12.7%)、嗳气(14.3%)、腹胀(22.2%)、胃脘痞满(28.6%)。聚类分析症状,分为三类：第一类：第一簇的症候表现为水饮、第二簇为痰浊、第三簇为脾虚。第二类：第一簇为心肾阴虚、第二簇为阴虚火旺。第三类为阳虚证的表现。第四类为阴阳两虚。2.实验研究2.1采用MOG35-55免疫C57BL小鼠建立EAE的慢性迁延型模型,发现小鼠首次发病时间在免疫后的14-17天,临床评分为1分左右。发病的高峰期一般在19-29天,临床评分在1-2.5分之间。随后进入慢性迁延期,临床评分维持在1-2分。个别小鼠发现了复发缓解的现象,并且随着时间的延长,复发的频率和症状评分逐渐降低,在3个月左右的时间后可能也与慢性迁延期的小鼠一样会达到一个平台期。2.2疏肝健脾固髓方治疗多发性硬化的机制探讨2.2.1在C57BL小鼠EAE模型显示,IL-21、IL-17F均为致炎性因子,呈现先升高后降低的变化规律,表明2者在疾病的早期发挥作用。激素组2者的升高不明显,中药组IL-17F则为下降趋势。2.2.2在EAE中TNF-α主要作用是致炎性的,表现为逐渐升高,但在激素组和中药组则为先下降后升高,尤其在4周时下降较为明显。IFN-γ为致炎性因子,在EAE中呈现逐渐升高的趋势,但在激素组和中药组呈现先下降后略微升高的趋势,且在第4周下降最为明显。提示激素和中药可能在疾病发作前期发挥抗炎作用,而急性发作后期抗炎作用逐渐减退。2.2.3IL-10和IL-4均为抑炎性因子,在EAE中呈现逐渐升高的趋势,在中药组亦表现升高,尤其在8周时IL-10升高更加明显,激素组则没有升高趋势。提示随着病程进展,EAE在急性期炎症损害髓鞘的同时,也启动了抗炎机制。激素在抗炎的同时也抑制了抑炎性的细胞因子的产生,而中药保护了抑制炎性的内源性积极因素,对于后期的修复和减少复发有利。2.2.4动物病理切片显示,EAE组脑组织和脊髓组织切片均可见炎症细胞浸润,血管增生等炎症表现。而在正常组脑组织切片中血管很少增生,未见炎症细胞浸润。结论：1.多发性硬化发作期总T细胞和CD4+T细胞相对较高,T细胞的这一规律可能为成为多发性硬化病情变化的指标。2.疏肝健脾固髓方治疗多发性硬化的机制可能是降低了致炎性细胞因子的表达,并保护抑炎性细胞因子的表达达到控制炎症的作用。虽然抑制炎症细胞因子的作用不及皮质激素,但对于抑炎细胞因子具有保护作用为其特点,这似可以对疏肝健脾固髓方控制急性期症状作用不如激素,而具有减少多发性硬化复发作用的临床现象的解释。3.小鼠EAE模型可作为多发性硬化药物抗炎作用靶点筛选模型,TNF-α、IFN-γ、 IL-21、IL-17F和IL-10、IL-4等指标较为敏感,可以用于药物筛选和判断疗效。为进一步的MS药物治疗和药物筛选提供了实验依据。4.在采用MOG35-55免疫C57BL小鼠建立的EAE慢性迁延型模型中出现的个别复发缓解现象,提示小鼠自身免疫情况可能存在较大的差异,在应用EAE这一经典模型时仍需要注意到可能对急性发作期药物筛选造成干扰。相反,而这一现象有可能为复发缓解型模型的来源提供新的研究思路。

全文目录

中英文缩略语对照一览表  6-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-12
前言  12-13
第一部分文献综述  13-50
  一. 多发性硬化相关免疫炎症机制的研究进展  13-39
    (一) T细胞免疫机制进展  13-17
      1.CD4T细胞  13-16
        1.1 Th1/Th2细胞  13-14
        1.2 Th17细胞  14-16
        1.3 Treg细胞  16
      2. CD8T细胞  16-17
    (二) 小鼠EAE中相关细胞因子的变化及其作用  17-27
      1. IL-21  18
      2. IL-23  18-20
      3. TNF-α  20
      4. IFN-γ  20-21
      5. IL-17A  21-22
      6. IL-17F  22
      7. IL-12p70  22-24
      8. GM-CSF  24-25
      9. IL-4  25-26
      10. IL-10  26-27
    (三) 结语  27
    参考文献  27-39
  二. 多发性硬化的中医文献研究  39-44
    1. 关于病名的认识  39
    2. 病因病机  39-40
    3. 中医药治疗多发性硬化的现状  40-43
    4. 中医药治疗多发性硬化的机制  43-44
    5. 小结  44
  三. 疏肝健脾固髓方治疗多发性硬化的依据  44-50
    参考文献  45-50
第二部分多发性硬化的临床研究  50-66
  一、多发性硬化患者的T细胞亚群的变化  50-56
    1 临床资料  50-51
    2 方法  51-52
    3 统计学处理  52
    4 结果  52-55
    5 结论  55
    6 讨论  55-56
  二、多发性硬化中医症候特点分析  56-66
    1 临床资料  57
    2 方法  57
    3 统计学处理  57
    4 结果  57-64
    5 结论  64
    6 讨论  64-65
    参考文献  65-66
第三部分实验研究  66-86
  实验一小鼠EAE动物模型的建立  66-70
    1 实验材料  66-67
    2 实验方法  67-68
    3 实验结果  68-70
    4 小结  70
  实验二疏肝健脾固髓方治疗EAE后的病理改变  70-75
    1 实验材料  70-71
    2 实验方法  71-72
    3 实验结果  72-75
    4 小结  75
  实验三疏肝健脾固髓方对EAE外周血炎症因子蛋白表达的影响  75-86
    1 实验材料  75-76
    2 实验方法  76-78
    3 实验结果  78-85
    4 小结  85-86
讨论  86-87
结论  87-88
附图  88-91
致谢  91-92
附件  92-96

疏肝健脾固髓方治疗多发性硬化的临床及机制的初步研究

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