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c-myb与c-myc基因在Dami细胞分化进程中的表达及相关性研究

作　者: 刘小琴
导　师: 赵丽
学　校: 兰州大学
专　业: 血液病学
关键词: 巨核细胞 PMA c-myb c-myc
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：研究佛波酯(PMA)诱导人巨核细胞白血病细胞株Dami细胞成熟分化过程中c-myb和c-myc mRNA及蛋白的表达变化,分析两原癌基因之间表达的相关性,探讨两者与巨核细胞系正常造血的关系。方法：采用MTT法检测PMA对Dami细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测PMA作用下Dami细胞的细胞周期变化,倒置显微镜观察PMA诱导后细胞的形态变化,瑞氏染色、透射电子显微镜鉴定Dami细胞的分化程度,Real-time qPCR. Western blot分别检测c-myb和c-myc mRNA及蛋白的表达水平。结果：1、PMA明显抑制Dami细胞增殖；2、流式细胞术检测细胞周期显示：PMA诱导后的细胞被阻滞在G0/G1期,S期比例显著降低,G2/M期细胞随着培养时间的延长,所占比例逐渐增大,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05)；3、倒置显微镜观察细胞形态显示：PMA诱导后的细胞体积增大,呈梭形改变,胞质向周围延伸；4、瑞氏染色显示：PMA诱导后的细胞核浆比例降低,胞核多呈分叶状,胞质着色变浅、胞浆丰富,细胞向成熟巨核细胞分化；5、透射电子显微镜观察细胞超微结构显示：PMA诱导后的细胞胞体显著增大,胞核呈多核改变,线粒体、游离核糖体等细胞器增加,并处于活跃状态；6、Real-time qPCR检测mRNA表达显示：c-myb、c-myc mRNA表达水平随着PMA诱导时间延长持续降低,诱导24h内,两原癌基因mRNA表达下降缓慢,诱导24h以后,两原癌基因mRNA表达迅速下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。c-myb、c-myc mRNA表达水平呈正相关(r=0.92,P=0.000)；7、Western blot检测蛋白表达显示：c-myb、c-myc蛋白表达水平随着PMA诱导时间延长持续降低,诱导12h内,两原癌基因蛋白表达与对照组比较,无显著性差异(P>0.05)。诱导24h以后,两原癌基因蛋白表达迅速下降,较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。c-myb、c-myc蛋白表达水平呈正相关(r=0.79,P=0.001)。结论：1、PMA明显抑制Dami细胞增殖,并诱导其成熟分化。2、在PMA诱导Dami细胞成熟分化进程中,c-myb、c-myc mRNA及蛋白表达持续下降,揭示两原癌基因参与了巨核细胞系造血,可能是巨核谱系病态造血发生的分子机制。3、Dami细胞分化进程中c-myb与c-myc基因mRNA及蛋白的表达呈正相关。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-8
第一章前言  8-11
第二章材料与方法  11-24
  2.1 实验材料  11-14
  2.2 实验方法  14-24
第三章结果  24-34
  3.1 PMA对Dami细胞增殖的抑制作用  24
  3.2 流式细胞术检测细胞周期  24-25
  3.3 倒置显微镜下动态观察细胞形态  25-26
  3.4 瑞氏染色观察细胞形态  26-28
  3.5 透射电子显微镜观察细胞超微结构  28
  3.6 Real-time qPCR检测c-myb、c-myc mRNA的表达  28-31
  3.7 Western blot检测c-myb、c-myc蛋白的表达  31-34
第四章讨论  34-41
  4.1 PMA与巨核细胞  34-35
  4.2 两原癌基因与巨核细胞  35-39
  4.3 临床应用价值  39-41
第五章结论  41-42
参考文献  42-46
英文缩写词与对照  46-47
在学期间研究成果  47-48
致谢  48

c-myb与c-myc基因在Dami细胞分化进程中的表达及相关性研究

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