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自噬对多发性骨髓瘤细胞生存及增殖的影响及其可能机制

作　者: 高灵素
导　师: 傅晋翔
学　校: 苏州大学
专　业: 血液病学
关键词: 多发性骨髓瘤雷帕霉素 3-MA U266细胞自噬凋亡
分类号: R733.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

【目的】观察雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤（3-MA）对体外正常培养及血清饥饿条件下多发性骨髓瘤（MM）细胞株生存及增殖的影响，分析其与自噬的相关性,并探讨其可能机制。【方法】MM细胞株U266在正常及血清饥饿条件下分别加入雷帕霉素和3-MA，以正常培养U266细胞、淋巴瘤细胞株Jurkat及无血清培养Jurkat为对照组；采用CCK8法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡；单丹磺酰尸胺（MDC）检测细胞自噬；RT-PCR方法检测自噬基因mtor、Atg5、Beclin1表达；免疫印迹分析自噬标记蛋白微管相关蛋白轻链3I/II（LC3I/II）及溶酶体相关膜蛋白1（LAMP1）含量的变化。【结果】U266细胞内在自噬水平高于Jurkat细胞，无血清培养可诱导U266细胞上调自噬水平，并可在血清饥饿状态下维持增殖约72h；雷帕霉素促进U266细胞自噬并刺激其增殖，3-MA也具有上调U266的自噬和增殖作用，但作用时间短。无血清培养24h后，与正常对照相比，U266细胞凋亡明显上升，分别为1.7±0.2%和16.1±0.35%，（P＜0.05）；加入雷帕霉素或3-MA后可抑制血清饥饿诱导的U266细胞凋亡，细胞凋亡率分别是6.2±0.76%和6.7±0.0.46%，（P＜0.01），其作用随着培养时间延长而减弱，细胞凋亡率趋于一致，至72h后3组细胞的凋亡基本相同，为30.0±1.87%、28.3±0.60%和29.0±0.90%（P＞0.05），去除处理因素后细胞凋亡率减低。在正常培养条件下雷帕霉素或3-MA可促进U266细胞凋亡，与对照组相比分别为1.7±0.2%、16.8±0.61%和19.1±1.0%（P＜0.01），随着培养时间的延长，雷帕霉素组细胞凋亡水无明显变化（16.9±0.46）%，但细胞死亡率明显上升达14.0±0.98%和21.5±1.15%，（P＜0.01），而3-MA组凋亡水较前明显下降（9.0±0.70%）。【结论】MM细胞内存在基础水平的自噬并高于淋巴瘤Jurkat细胞株。在常规培养条件下雷帕霉素及3-MA均可下调细胞增殖水平，并诱导细胞凋亡；血清饥饿条件下U266细胞通过上调自噬维持细胞生存和增殖，雷帕霉素通过抑制mTOR蛋白增强该作用，但是过度抑制mTOR蛋白可阻止U266的自噬，下调细胞增殖，而3-MA对细胞内自噬具双重作用。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
研究背景  9-18
  参考文献  13-18
第一部分雷帕霉素及 3-MA 对多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡的影响  18-31
  前言  18
  1 研究材料与方法  18-22
  2 结果  22-29
  3 讨论  29-30
  参考文献  30-31
第二部分诱导自噬对多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡的影响及可能机制  31-51
  前言  31
  1 研究材料与方法  31-36
  2 结果  36-48
  3 讨论  48-50
  参考文献  50-51
结论  51-52
综述  52-61
  参考文献  57-61
攻读硕士学位期间公开发表的论文  61-62
中英文对照缩略词表  62-63
致谢  63-64

自噬对多发性骨髓瘤细胞生存及增殖的影响及其可能机制

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