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MicroRNAs在冠心病血瘀证中的分子机制研究
作 者: 鲍岩岩
导 师: 刘建勋
学 校: 中国中医科学院
专 业: 中西医结合基础
关键词: 冠心病血瘀证 心脏保护 生物信息学 细胞凋亡 PI3K
分类号: R541.4
类 型: 博士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
目的:MicroRNAs (miRNAs)具有调控细胞分化、增殖、凋亡的功能,与心血管疾病密切相关。本研究使用TaqMan低密度芯片(TLDA)从冠心病血瘀证24h大鼠模型心脏组织中筛选差异表达的miRNAs,采用生物信息学分析的手段对差异表达的miRNAs进行生物信息学分析,并构建miRNAs与Gene Ontology (GO)、Pathway间的相互调控网络。分析结果发现,凋亡通路仅被microRNA-384-5p (miR-384-5p)调控。因此,本研究旨在确定miR-384-5p在大鼠冠心病血瘀证中的作用及机制。方法:1.构建冠心病血瘀证24h大鼠模型,通过基因芯片技术筛选出差异表达的miRNAs;2.采用生物信息学分析的手段,对差异表达的miRNAs进行Gene、 GO、Pathway等生物信息学分析,并构建miRNA-Gene-network、 miRNA-GO-network、miRNA-Pathway-network及Pathway-Pathway-network;3.采用qRT-PCR手段对凋亡通路相关的具有显著意义的靶基因(PIK3CD,PPP3CA, PPP3CB, PPP3R1, CASP3及IL1A)进行验证;4.构建过表达miR-384-5p及miR-384-5p抑制剂的H9c2细胞模型,通过MTT、Western Blot等技术在细胞水平上确定miR-384-5p对H9c2细胞凋亡的影响;5.通过双荧光素酶报告基因分析确定miR-384-5p的靶基因;6.构建过表达miR-384-5p及miR-384-5p抑制剂的H9c2细胞模型,通过Western Blot技术在细胞水平上确定miR-384-5p对其靶基因的影响。结果:1.基因芯片筛选结果显示,冠心病血瘀证大鼠的心脏组织中16个miRNAs的表达有显著性变化,其中12个上调,4个下调;2.生物信息学手段构建了miRNA-Gene-network、miRNA-GO-network、miRNA-Pathway-network及Pathway-Pathway-network;3.qRT-PCR进一步验证了PIK3CD, PPP3CA, PPP3CB, PPP3R1, CASP3及IL1A的表达,发现PIK3CD, PPP3CA, PPP3R1, CASP3及IL1A的表达均显著上调,与信息分析结果相符合,PIK3CB表达下调,其信息分析结果为假阳性;4.MiR-384-5p可以上调H9c2细胞cleaved caspase3的表达,相反miR-384-5p抑制剂可以下调其表达,揭示了miR-384-5p可以调节凋亡通路;5.MiR-384-5p抑制H9c2细胞活力,而miR-384-5p抑制剂可以促进H9c2细胞活力,说明miR-384-5p的表达下调可以提高H9c2细胞活力;6.MiR-384-5p抑制剂促使H9c2细胞PIK3CD蛋白表达显著上调;7.无论是在模型大鼠心脏组织还是缺氧的H9c2细胞中,miR-384-5p的表达水平均显著下调,并且PIK3CD蛋白的表达水平均显著上调;8.双荧光素酶报告基因分析结果显示,miR-384-5p可与PIK3CD3’-UTR区域结合,验证了二者间的靶基因关系。结论:通过上述研究结果,可以得出结论:大鼠心肌细胞miR-384-5p可以作为一种保护因子,通过下调其表达,靶向调节PIK3CD,在心脏保护过程中起到重要作用。
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全文目录
中文摘要 5-7 Abstract 7-9 缩略语表 9-10 文献综述 10-19 前言 19-21 第一章 MICRORNAS在大鼠冠心病血瘀证中调控网络研究 21-60 材料与方法 21-31 实验结果 31-58 讨论 58-60 第二章 MICRORNA-384-5P在大鼠心肌缺血诱导的心肌保护中的作用 60-82 材料与方法 60-71 实验结果 71-79 讨论 79-82 结论 82-83 参考文献 83-91 致谢 91-92 个人简历 92-93 查新报告书 93-97
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管(循环系)疾病 > 心脏疾病 > 冠状动脉(粥样)硬化性心脏病(冠心病)
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