学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

低分子量海带岩藻多糖的制备及其抗肿瘤活性的研究

作 者: 刘颖
导 师: 蔡敬民
学 校: 安徽农业大学
专 业: 微生物学
关键词: 海带 岩藻多糖 微生物酶解 分级纯化 抗肿瘤活性
分类号: R283
类 型: 硕士论文
年 份: 2012年
下 载: 47次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
 

内容摘要


岩藻多糖具有多种生物活性,如抗病毒、抗凝血、抑制肿瘤以及调节免疫功能等。岩藻多糖的生物活性与其结构相关,包括硫酸根含量、单糖组成及比例、分子量大小等。为此,人们对岩藻多糖开展了许多相关的研究,并且逐渐把岩藻多糖的结构分析和生物活性研究相结合,本文对海带岩藻多糖开展了以下几方面的研究工作:1、海带岩藻多糖粗糖的分离纯化及成分分析:购自烟台的粗岩藻多糖经乙醇分步沉淀,获得10.77%的岩藻多糖纯品。分析其化学成分,结果表明,多糖占总糖含量的68.80±0.45%,岩藻糖占总糖含量的30.20±1.44%,蛋白质占总糖含量1.30±0.32%,糖醛酸占总糖含量的11.49±0.64%,硫酸根占总糖含量9.20±1.02%。薄层层析表明其含有D-半乳糖、L-岩藻糖,可能含有D-甘露糖和/或D-阿拉伯糖。气相色谱分析岩藻多糖中的单糖组分为L–岩藻糖,L–阿拉伯糖,D–木糖,D–甘露糖,D–葡萄糖,D–半乳糖。含量分别为31.33%,15.16%,12.83%,10.72%,20.99%,8.97%。2、最高抗肿瘤活性组分的制备及性质鉴定:初步纯化的岩藻多糖经微生物酶解得到具有较低分子量的岩藻多糖FS;经DEAE-Sepharose FF凝胶层析,得到组分F1、F2、F3、F4、F5、F6,MTT法检测获得产物抑制Hep-2肿瘤细胞生长的活性,结果表明:低分子量岩藻多糖F5具有最高的抑制肿瘤生长活性,达到48.05±0.73%,其余组分抑制Hep-2肿瘤细胞生长的能力较弱。采用气相色谱和高效液相色谱对F5组分进行单糖组成和分子量范围进行分析,结果表明, F5含有大量的岩藻糖和少量的L–阿拉伯糖,D–木糖,D–甘露糖,D–葡萄糖,D–半乳糖,其含量分别为42.42%,8.71%,9.28%,11.50%,10.61%,17.48%;F5分子量范围集中在12.107-33.329kDa。同时测得F5的硫酸根含量为16.21%±0.58%。本实验最终获得了主要成分是L-岩藻糖,同时具有较低分子量和较高硫酸酯含量的岩藻多糖组分。3、岩藻多糖抗肿瘤活性的初步分析:MTT实验表明F5的抗肿瘤活性呈现剂量依赖性和时间依赖性,IC50=0.149mg/mL。镜检发现处理的Hep-2细胞在形态表现为染色质浓缩,细胞收缩,出现类似细胞凋亡的现象。单细胞凝胶电泳发现视野中有彗星出现,且随着处理时间的延长,彗星拖尾几率增加,表明F5对Hep-2细胞DNA有损伤,且随F5处理时间的延长,损伤效应增强。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-8
文献综述  8-19
1 引言  19-20
  1.1 研究的目的与意义  19
  1.2 本研究拟解决的问题  19-20
2 材料和方法  20-33
  2.1 实验材料  20-24
    2.1.1 菌种  20
    2.1.2 细胞株  20
    2.1.3 原料  20
    2.1.4 仪器设备与试剂  20-21
    2.1.5 色谱柱及填料  21
    2.1.6 产酶固态培养基  21
    2.1.7 主要试剂的配制  21-24
  2.2 实验方法  24-33
    2.2.1 多糖纯化实验  24
    2.2.2 分析方法  24-28
    2.2.3 酶解法制备低分子量岩藻多糖  28-29
    2.2.4 分级纯化实验  29-30
    2.2.5 细胞培养  30-31
    2.2.6 制备组分抗肿瘤活性的研究  31
    2.2.7 最高抗肿瘤活性组分纯度及分子量鉴定  31
      a. 液相色谱条件  31
      b. 葡聚糖标准曲线制作  31
      c. 样品测定  31
    2.2.8 F5 对 Hep-2 细胞抑制活性的测定  31-32
    2.2.9 抗肿瘤机理的初步研究  32
    2.2.10 统计学处理  32-33
3 结果与讨论  33-46
  3.1 岩藻多糖的分离及成分分析  33
  3.2 岩藻多糖单糖组成测定  33-36
  3.3 微生物酶法制备低分子量岩藻多糖  36
  3.4 岩藻多糖的分级纯化  36-38
  3.5 分级组分抗肿瘤活性的研究  38-39
  3.6 F5 性质鉴定  39-42
    3.6.1 F5 分子量的测定  39-41
    3.6.2 F5 单糖组成分析  41
    3.6.3 F5 硫酸根含量的测定  41-42
  3.7 F5 对 HEP-2 细胞抑制活性的测定结果  42-43
  3.8 F5 对 HEP-2 细胞形态学影响  43-44
  3.9 彗星电泳检测 HEP-2 细胞 DNA 的损伤  44-46
结论  46-47
参考文献  47-54
致谢  54-55
作者简介  55-56
在读期间发表的学术论文  56

相似论文

  1. 沙利度胺衍生物的设计合成及抗肿瘤活性研究,R965
  2. 低分子量亨氏马尾藻岩藻聚糖硫酸酯的制备及抗肿瘤活性研究,TS254.9
  3. 鬼臼毒素衍生物的设计、合成及抗肿瘤活性研究,R284
  4. 半导体激光和5-氟尿嘧啶缓释植入剂对口腔肿瘤细胞抑制作用实验研究,R739.8
  5. 海藻发酵酱加工工艺研究,TS264.2
  6. 模拟空间诱变铜绿假单胞菌M14808产鼠李糖脂发酵工艺的优化及动力学研究,TQ920.6
  7. 非活体藻类生物吸附及海带生物吸附剂的初步研究,X13
  8. 海藻中几种金属元素形态的研究,TS254.7
  9. 海带EST-SSR标记开发及TPS基因的克隆和比较遗传学研究,S968.421
  10. 席夫碱类化合物的合成及其抗肿瘤活性的研究,R730.5
  11. 工厂化养殖水体的生物资源化处理研究,X703
  12. 工业木质素分级分离的基础研究,TQ351.377
  13. 不同海水养殖模式对桑沟湾生态系统服务的影响,S931.3
  14. 蔗糖亚硒酸酯的合成及其生物活性研究,R96
  15. A类清道夫受体通路抑制内质网应激诱导的巨噬细胞自噬,R730.2
  16. 高温胁迫对海带配子体的生理影响及SAMS基因的克隆与分析,Q943.2
  17. 海带化工废弃物高效同步发酵产乙醇工艺,TQ223.122
  18. 七个中国海带养殖群SRAP标记的遗传多样性研究,S917.3
  19. 五个海带养殖群体遗传多样性的AFLP分析,S968.421
  20. 海带微卫星标记的开发及遗传多样性研究,S968.421
  21. 不同饲料对刺参(Apostichopus japonicus)生长、消化生理和能量收支的影响,S968.9

中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药炮制、制剂
© 2012 www.xueweilunwen.com