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益气涤痰化瘀方减轻哮喘小鼠气道炎症病变的免疫分子机理研究

作　者: 韩妮萍
导　师: 肖春杰
学　校: 云南大学
专　业: 生物工程
关键词: 益气涤痰化瘀方哮喘气道炎症减轻
分类号: R259
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

[目的]1、选择云南名中医临床治疗哮喘有效验方——益气涤痰化瘀方进行实验研究,从免疫平衡的角度寻找其作用靶点。2、制备哮喘小鼠动物模型,观察益气涤痰化瘀方对免疫细胞Th1/Th2、Th17/Treg平衡的调节作用,以期初步揭示该方治疗哮喘的作用机理。[方法]1.建立哮喘小鼠模型：50只SPF级雌性BALB/C小鼠,随机分为正常对照组、哮喘模型组、益气涤痰化瘀方高、中、低剂量组。对哮喘模型组和药物干预组小鼠于实验第1、8、15天腹腔注射致敏液(含50μg OVA),第22～28天连续7天每日雾化吸入含2%OVA的激发液使小鼠哮喘发作；正常对照组用生理盐水代替OVA进行致敏和激发。2.药物干预实验：在实验第22～28天哮喘的激发阶段,每日2%OVA雾化吸入激发哮喘前30分钟,对药物干预组小鼠以灌胃方式给予益气涤痰化瘀方中药治疗；正常对照组和哮喘模型组小鼠以灌胃方式给予生理盐水治疗。3.指标检测：观察各组小鼠行为学改变；制作肺组织病理切片进镜下观察；收集BALF进行白细胞总数及分类计数；取小鼠血清以ELISA检测IFN-γ、IL-4、 IL-/、IFN-γ、IL-17浓度。[结果]1.行为学观察与哮喘模型组小鼠相比,益气涤痰化瘀方高、中、低剂量组小鼠症状、体征有不同程度减轻,症状、体征有较大改善,在饲养过程中,毛色光泽度好,体重增加明显,仅有一例死亡,整体情况较好。②组织病理改变情况肺组织病理切片可观察到：与哮喘模型组小鼠相比,益气涤痰化瘀方高、中、低剂量组小鼠肺内细支气管及血管周围炎性细胞有所减少,尤其是中剂量组较为明显,气道壁结构完整,气道上皮黏液分泌物减少。③气道炎性细胞聚集程度与哮喘模型组小鼠相比,益气涤痰化瘀方中剂量组小鼠BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS)、中性粒细胞(NEU)、淋巴细胞(LYM)分类计数都有减少(P<0.05)。益气涤痰化瘀方高、低剂量组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS)、中性粒细胞(NEU)、淋巴细胞(LYM)分类计数都有减少趋势,但差异无统计学意义。④血清中细胞因子水平与哮喘模型组比较,益气涤痰化瘀方高、中剂量组小鼠血清IFN-γ浓度升高(P<0.05),IL-4浓度降低(P<0.05),IL-4/IFN-γ比值降低(P<0.05)；IL-17浓度显著降低(P<0.01)。益气涤痰化瘀方低剂量组小鼠血清IFN-γ浓度升高(P<0.05),IL-4浓度有降低趋势(P>0.05),IL-4/IFN-γ比值降低(P<0.05)；IL-17浓度明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。益气涤痰化瘀方高、中、低剂量组小鼠组问IFN-γ、IL-4、IL-4/IFN-γ比值、IL-17水平无统计学差异(P>0.05)。[结论]1.益气涤痰化瘀方可对免疫细胞Th2、Th17优势所致的免疫失衡状态进行调节,恢复Th1/Th2、Th17/Treg平衡；2.益气涤痰化瘀方治疗哮喘的作用机理之一是通过调节机体平衡而减轻哮喘急性气道炎性病变,从而达到防治哮喘的作用。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-10
引言  10-12
第一部分实验研究  12-33
  1. 检测指标选择及意义  12-14
    1.1 支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数及分类计数检测  12
    1.2 血清Th细胞亚群相关细胞因子水平检测  12-14
  2. 实验材料和方法  14-22
    2.1 实验材料  14-18
      2.1.1 实验动物  14-15
      2.1.2 益气涤痰化瘀方组方及制备  15-16
      2.1.3 药品和试剂  16-17
      2.1.4 主要仪器与设备  17-18
    2.2 实验方法  18-22
      2.2.1 复制支气管哮喘小鼠动物模型  18-19
      2.2.2 药物干预实验  19
      2.2.3 标本采集及处理  19-20
      2.2.4 指标检测  20-21
      2.2.5 统计分析  21-22
  3. 技术路线  22-23
  4. 实验结果  23-33
    4.1 小鼠激发过程中的行为学观察  23-24
    4.2 肺组织病理学观察(HE染色)  24-25
    4.3 各组小鼠BALF中炎性细胞总数及分类计数  25-26
    4.4 各组小鼠血清Th相关细胞因子检测结果  26-33
      4.4.1 各组小鼠血清Th1相关细胞因子IFN-γ检测结果  26-28
      4.4.2 各组小鼠血清Th2相关细胞因子IL-4检测结果  28-29
      4.4.3 各组小鼠血清Th2优势相关指标IL-4/IFN-γ检测结果  29-31
      4.4.4 各组小鼠血清Th17相关细胞因子IL-17检测结果  31-33
第二部分结果与讨论  33-38
  1. 支气管哮喘小鼠模型的构建  33-34
  2. 益气涤痰化瘀方对哮喘气道炎性病变的影响  34-38
第三部分结论  38-39
文献综述  39-54
  一、支气管哮喘免疫失衡机制研究概况  39-44
  二、支气管哮喘模型研究概况  44-47
  三、哮喘中医治则治法研究概况  47-49
  四、益气涤痰化瘀方的现代药理学研究概况  49-54
参考文献  54-61
在读期间成果  61-62
致谢  62

益气涤痰化瘀方减轻哮喘小鼠气道炎症病变的免疫分子机理研究

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