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丁香叶乙醇提取物抗猪流感病毒的研究

作 者: 李贤贤
导 师: 李艳华
学 校: 东北农业大学
专 业: 基础兽医学
关键词: 丁香叶醇提物 猪流感病毒 体外试验 体内试验 细胞因子
分类号: S855.3
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要


猪流感(swine influenza, SI)是由正黏病毒科猪流感病毒(swine influenza virus, SIV)引起的猪急性高度传染性疾病。主要临床症状表现为体温升高、食欲不振、呼吸困难、咳嗽、流产以及延迟出栏等。SI一旦发生,将会给养殖业造成巨大损失,尤其当与其它呼吸道疾病继发或混合感染时,损失更是无法估量。SIV不仅可感染猪,同时也具有感染禽类和人、马等其他哺乳动物的能力。而且猪可被禽流感病毒(Avian Infiuenza Virus, AIV)和人流感病毒感染,是流感病毒新毒株产生的“孵育器”。SIV及猪的这些特征决定了它们在流感病毒的种间传播中具有不可替代的地位。所以,SI除了其重要的兽医卫生学意义外,更重要的还在于其显而易见的公共卫生学意义。目前预防SI发生与传播的最有效方式是疫苗接种,但是由于SIV亚型多,变异快,制备有效的疫苗困难重重,而抗流感病毒的化学合成药物既有较强的毒副作用,又容易诱导病毒产生耐药性。这种现状下,在我国的中医药宝库中寻找有效药物、研发新型制剂来防治SI就成为一项很有意义的研究工作。丁香叶是木犀科丁香属植物朝鲜丁香(Syringa diatata Nakai)、洋丁香(Syringa vulgaris L.)或紫丁香(Syringa oblata Lindl)的干燥叶,具有广谱的抗菌和抗病毒的作用,但尚未见有关丁香叶对SIV作用的研究报道。因此本试验通过对丁香叶乙醇提取物体内外抗SIV的试验研究及其对SIV感染小鼠血清中细胞因子的影响,阐明丁香叶抗SIV作用和其可能的作用机理,为临床防治SI提供理论依据。体外试验首先采用细胞病变法(CPE)和噻唑蓝(MTT)比色法测定丁香叶醇提物(EFFL)及阳性药物金刚烷胺(AMA)对狗肾细胞(MDCK)的毒性,确定其半数有毒浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0),然后观察丁香叶醇提物及金刚烷胺在不同作用方式下(先感染病毒后加药、先加药后感染病毒、感染病毒同时加药、药与病毒作用后再加)对SIVA/swine/Tianjing/14/2009(H1N1)的体外抑制作用。结果显示:丁香叶醇提物对MDCK细胞的TC0为250μg/mL, TC50为759.98±9.42μg/mL;金刚烷胺对MDCK细胞的TC0为31.3μg/mL,TC50为368.43±7.28μg/mL。在不同作用方式下给药(先感染病毒后加药、先加药后感染病毒、感染病毒同时加药、药与病毒作用后再加),丁香叶醇提物的治疗指数(TI)分别为13.52,6.82,15.76,16.30μg/mL。体内实验首先验证丁香叶醇提物对Balb/c小鼠的毒性,确定无毒浓度。然后通过鼻腔感染SIV,复制SIV Balb/c小鼠模型,并采取灌胃给药的方式,观察丁香叶醇提物对SIV感染小鼠的体重、肺指数、肺脏病毒滴度以及肺脏病理组织变化的影响,最后采用ELISA方法检测小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10的水平,评价丁香叶醇提物抗SIV作用及其可能的作用机制。结果显示:Balb/c小鼠对丁香叶醇提物的最大耐受浓度为1000mg/kg/d;丁香叶醇提物能明显降低肺指数、肺脏病毒滴度、改善肺脏病理变化;猪流感病毒感染Balb/c小鼠后,感染模型组TNF-α,IL-6及IL-10的含量均高于正常对照组(P<0.05),IFN-γ的含量则有所下降(P<0.05)。与模型组相比,丁香叶醇提物可以明显升高血清中IFN-γ、IL-10水平(P<0.05),降低TNF-α、IL-6水平(P<0.05)。综上所述,丁香叶醇提物不仅具有很好的抗猪流感病毒的作用,而且可以调节细胞因子的分泌,减轻由猪流感病毒所致的免疫损伤。

全文目录


摘要  8-10
Abstract  10-12
1 引言  12-24
  1.1 猪流感概况  12-17
    1.1.1 猪流感病毒的概述  13
    1.1.2 猪流感病毒的生物学特性  13-14
    1.1.3 流感病毒的遗传变异  14
    1.1.4 流感病毒感染过程中细胞因子的作用  14-16
    1.1.5 猪流感的公共卫生意义  16-17
  1.2 抗流感药物的研究进展  17-21
    1.2.1 化学合成药物抗流感病毒研究进展  17-19
    1.2.2 中药抗流感病毒的研究进展  19-21
  1.3 丁香叶的药理作用研究进展  21-23
    1.3.1 抗菌作用  21-22
    1.3.2 抗病毒作用  22
    1.3.3 抗炎镇痛作用  22
    1.3.4 降温作用  22
    1.3.5 增强机体的体液免疫功能  22
    1.3.6 保肝利胆作用  22
    1.3.7 其他作用  22-23
  1.4 研究的目的与意义  23-24
2.材料与方法  24-31
  2.1 材料  24-25
    2.1.1 细胞与病毒  24
    2.1.2 药物  24
    2.1.3 动物  24
    2.1.4 主要试剂及仪器  24-25
  2.2 试验方法  25-31
    2.2.1 丁香叶醇提物的提取  25-26
    2.2.2 猪流感病毒对 MDCK 细胞感染性(TCID50)的测定  26
    2.2.3 丁香叶醇提物对 MDCK 细胞毒性实验研究  26
    2.2.4 丁香叶醇提物体外抗猪流感病毒实验研究  26-27
    2.2.5 丁香叶醇提物对小鼠最大耐受量的测定  27
    2.2.6 实验动物的分组  27-28
    2.2.7 感染方法  28
    2.2.8 给药方法  28
    2.2.9 观察指标  28-30
    2.2.10 统计学分析  30-31
3.结果与分析  31-38
  3.1 体外实验结果与分析  31-33
    3.1.1 丁香叶醇提物对 MDCK 细胞的毒性  31-32
    3.1.2 猪流感病毒对 MDCK 细胞感染性(TCID50)的测定  32
    3.1.3 丁香叶体外抗猪流感病毒试验结果  32-33
  3.2 体内试验结果与分析  33-38
    3.2.1 丁香叶醇提物对小鼠的最大耐受量测定结果  33
    3.2.2 丁香叶醇提物对病毒感染小鼠体重变化的影响  33-34
    3.2.3 丁香叶醇提物对病毒感染小鼠肺脏病毒含量的影响  34
    3.2.4 丁香叶醇提物对病毒感染小鼠肺指数的影响  34-35
    3.2.5 丁香叶乙醇提取物对小鼠肺脏病理组织变化的影响  35-36
    3.2.6 丁香叶乙醇提取物对猪流感病毒感染小鼠血清中细胞因子的影响  36-38
4 讨论  38-41
5 结论  41-42
致谢  42-43
参考文献  43-50
攻读硕士学位期间发表的论文  50

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 兽医传染病学 > 病毒病
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