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通光藤抗癌活性物质基础及其制剂研究

作　者: 王曙
导　师: 侯世祥
学　校: 四川大学
专　业: 药剂学
关键词: 通光藤通光散本草考证 C21甾体皂苷通光藤苷L-P 抗癌作用总皂苷粉针剂工艺定量分析
分类号: R283
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

以通光藤[萝藦科牛奶菜属植物通光散（Marsdenia tenacissima Robx．Wight et Arn）的干燥藤]为原料生产的“消癌平片”在临床用于治疗癌症具有确切疗效。但国内外文献对通光藤成分的研究报道较为少见且不深入，仅称其含有多种皂苷、生物碱、有机酸、多糖、树脂及色素等多种化学成分；未见针对其抗癌活性成分的研究报道。通光藤的基源复杂、同名异物现象严重，国内以通光藤为原料制成的水针剂以绿原酸为其含量测定的指标成分，明显不足以保证其在临床应用时的安全、有效和质量稳定。为了深入地探索通光藤的抗癌活性物质基础、作用机理，开发出安全、有效、质量可控的现代中药制剂，本文进行了如下研究：1．本文通过本草考证和试验研究，总结了不同地方、不同的民族和不同的文献书籍采用的各种异名、地方名和别名，发现云南的“通光藤”和四川的“奶浆藤”均为同一生药，彼此为同物异名；而云南的“通光藤”的别名“乌骨藤”与贵州的“乌骨藤”为同名异物；首次报道了四川有植物通光散的分布，并对其进行了组织形态学描述、显微特征描绘、皂苷类成分分离与结构鉴定，共分离提纯了7个化合物，并通过光谱数据和化学分析鉴定其结构，其中包括4个新C₂₁甾体皂苷，分别为通光藤苷L（tenacissoside L，T）、通光藤苷M（tenacissoside M，，Ⅱ）、通光藤苷N（tenacissoside N，Ⅲ）、通光藤苷O（tenacissoside O，Ⅳ）；一个已知C₂₁甾体皂苷，但首次从通光藤中分离得到，命名为通光藤苷P（tenacissoside P，Ⅴ）；以及2个已知化合物：胡萝卜苷（daucosterol，Ⅵ），β-谷甾醇（β-sitosterol，Ⅶ）。2．通过MTT实验（四甲基偶氮唑盐还原反应），对通光藤苷L-P进行体外活性测定，结果表明通光藤苷L-P对人肝癌细胞Bel-7402，人胃癌细胞SGC-7901，小鼠结肠癌细胞C-26以及小鼠肝癌细胞Heapal-6的生长均有抑制作用，并显示出不同的敏感性；对正常的人胚肾细胞293和人肝细胞L₀₂均无细胞毒性。采用流式细胞分析技术，观察到70％乙醇洗脱部位可以诱导人胃癌细胞SGC-7901发生凋亡，细胞主要停留在G₁期，检测到Sub-G₁峰，约占40.58％。3．以川产通光藤为原料，对其皂苷的提取分离工艺进行了研究：采用水煎煮、两次大孔吸附树脂吸附一大孔离子交换树脂纯化的工艺，制得皂苷的收率约为1％，含量高于90％。以所得皂苷为原料，实验了用冷冻干燥法生产冻干粉针剂的工艺并初步试制出通光藤皂苷粉针剂。以通光藤苷L、通光藤苷M、通光藤苷N和通光藤苷O为对照品，建立了通光藤皂苷粉针剂的定性、定量分析方法，为其质量标准的制定提供了关键资料。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一章通光藤的本草考证与鉴定  11-20
  1.本草考证  11-12
  2.乌骨藤的辩考  12-16
  3.生药鉴定  16-19
    3.1 实验材料、方法和仪器  16
    3.2 原植物形态特征  16
    3.3 生药性状  16-17
    3.4 显微鉴定  17-18
    3.5 理化鉴定  18-19
  4.结果与讨论  19-20
第二章通光藤中甾体皂苷类成分的分离与鉴定  20-37
  1.提取分离流程图  21
  2.化合物的结构鉴定  21-29
  3.实验部分  29-35
    3.1 仪器、材料及试剂  29
    3.2 通光藤药材的来源  29
    3.3 通光藤提取分离方法  29
    3.4 化合物理化性质和波谱数据  29-35
  4.实验讨论  35-37
第三章通光藤抗肿瘤活性部位的筛选  37-48
  1.活性部位的初步筛选  37-40
    1.1 MTT活性筛选原理  37
    1.2 实验试剂与仪器  37-38
    1.3 实验步骤  38
    1.4 效价评价  38-39
    1.5 实验结果  39
    1.6 实验讨论  39-40
  2.通光藤苷L～P的体外抗肿瘤活性的筛选  40-45
    2.1 对正常细胞的影响  41-42
    2.2 对肿瘤细胞的影响  42-45
  3.通光藤体外抑制肿瘤细胞生长机制的初步研究  45-48
    3.1 实验材料与仪器  45-46
    3.2 实验方法  46
    3.3 结果  46-47
    3.4 讨论  47-48
第四章通光藤总皂苷提取、精制工艺研究  48-62
  1.提取试验  48-50
    1.1 原料  48
    1.2 提取次数预试  48-49
    1.3 通光藤总皂苷提取工艺均匀设计实验  49-50
    1.4 验证试验  50
  2.纯化  50-56
    2.1 提取液的浓缩  50
    2.2 用大孔吸附树脂纯化浓缩液  50-53
    2.3 重复吸附  53
    2.4 用BS-Ⅱ弱碱大孔阴离子交换树脂对浸膏_2的纯化实验  53-56
  附1.通光藤总皂苷的紫外可见分光光度法含量测定研究  56-62
第五章通光藤皂苷粉针剂制备工艺研究  62-68
  1.仪器与试剂  62
  2.方法与结果  62-66
    2.1 冻干添加剂及其用量选择  62
    2.2 冻干添加剂用量选择  62-63
    2.3 主药溶液的浓度选择  63
    2.4 冻干条件的工艺优选  63-66
    2.5 通光藤总皂苷粉针剂冻干工艺验证  66
  3.讨论  66-68
第六章通光藤皂苷粉针剂HPLC-ELSD定性定量分析  68-77
  1.实验仪器和试药  68
  2.色谱条件的选择  68-69
    2.1 考察对象  68
    2.2 色谱条件  68
    2.3 对照品溶液的配制  68
    2.4 供试样品溶液的制备  68-69
    2.5 测定法  69
  3.主要方法学考察  69-76
    3.1 色谱条件的选择与系统适用性试验  69-70
    3.2 耐用性试验  70-71
    3.3 专属性考察  71
    3.4 线性关系的考察  71-74
    3.5 精密度试验  74
    3.6 重现性试验  74
    3.7 加样回收试验  74-76
    3.8 样品含量的测定  76
  4.定性鉴别  76-77
参考文献  77-81
附图  81-98
综述:通光藤的药理作用与临床应用进展  98-108
  综述参考文献  106-108
致谢  108-109

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