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牛免疫缺陷病毒介导细胞膜融合机制研究及基于减毒重组痘苗病毒载体的丙型肝炎病毒疫苗策略研究

作　者: 李姝
导　师: 田波；张林琦；陈志伟
学　校: 武汉大学
专　业: 微生物学
关键词: BIV 膜融合七肽重复序列 HCV 重组痘苗病毒
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

BIV-兔模型是研究HIV感染的一种很有前景的小动物模型。然而,尽管它在基础和临床研究中很重要,目前对BIV及其感染机制知之甚少。在本文的研究中,通过生物化学和生物物理的方法,确定了BIV Env中两个七肽重复区(heptad repeat region, HR)的特性(由于BIV Env与其他的慢病毒如HIV, SIV和FIV等的相似性较小,我们通过程序只能预测出一个HR区域)。并且证实了预测出的HR区能够像其他慢病毒一样在膜融合过程中形成稳定的三聚体发夹结构或六螺旋束。也证实了BIV HR2多肽在病毒介导的细胞融合过程中具有很好的抑制活性,类似这种抑制活性曾被证实在AIDS治疗上具有重大意义并且已经引导了抗AIDS药物的发现。本文研究是我们揭示大多不为人知的BIV致病机制的第一步,也是联系BIV研究与HIV研究的桥梁。HCV是肝癌的主要病原体,发展抗HCV感染的预防性和治疗性疫苗迫在眉睫。本文研究集中于构建和评估基于具有复制能力的MVTT(modified vaccinia TianTan)和复制缺陷的MVA(modified vaccine Ankara)载体的HCV疫苗。痘苗病毒天坛株作为疫苗载体在消灭天花的战役中成功的免疫了成百万的中国人。由于MVTT和MVA有不同的复制能力,本文研究比较了两者在免疫动物中免疫原性的强弱,以判断两者不同的复制能力是否对免疫原性水平有影响。因为HCV1b基因型是全世界主要的基因型,我们利用Genbank中发表的序列信息,采用电脑模拟设计和重叠PCR技术构建了同源的密码子优化的HCV-1b全长序列(COP-HCV-1b-E1E2)。我们发现较之未优化片断, COP-HCV-1-E1E2糖蛋白能以更高水平在293T细胞中表达。带有COP-HCV-1b-E1E2糖蛋白的HCV-1假病毒能够感染Huh7.5肝细胞系并且对HCV-1b E2特异的单克隆抗体中和反应敏感。为了研究COP-HCV-1b-E1E2的免疫原性,我们构建了两种重组痘苗病毒,分别基于MVTT载体和MVA载体。之后我们用这两种重组痘苗病毒(MVTT-COP-E1E2和MVA-COP-E1E2)经免疫Blab/c小鼠和兔子。这两种重组痘苗病毒都能诱导高水平的针对带有HCV-1b糖蛋白的假病毒的中和抗体反应。我们希望这种以MVTT或MVA为载体的优化了的功能一致COP-HCV-1b-E1E2基因能成为抵抗HCV感染的治疗性和预防性的有效疫苗。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第一部分牛免疫缺陷病毒（BIV）介导细胞膜融合机制的研究及其七肽重复区蛋白抑制物的设计  8-38
  引言  8-10
  第一章文献综述  10-20
    一、囊膜病毒膜融合的分子机制  10-16
    二、牛免疫缺陷病毒研究进展  16-20
  第二章实验研究  20-38
    一、BIV膜融合蛋白核心结构研究  20-29
      1.1 材料与方法  20-23
      1.2 实验结果  23-27
      1.3 讨论  27-29
    二、靶向BIV膜融合蛋白核心区的蛋白抑制物设计  29-37
      2.1 材料与方法  29-32
      2.2 实验结果  32-36
      2.3 讨论  36-37
    总结  37-38
第二部分基于减毒重组痘苗病毒载体的丙型肝炎病毒(HCV)疫苗策略研究  38-77
  引言  38-41
  第一章文献综述  41-54
    一、丙型肝炎病毒的研究概况及其疫苗的研究进展  41-48
    二、痘苗病毒作为疫苗载体的研究进展  48-54
  第二章实验研究  54-77
    一、针对HCV1b亚型E1E2 基因的重组MVA和VTT病毒引起免疫应答的比较  54-70
      1.1 材料与方法  54-60
      1.2 实验结果  60-67
      1.3 讨论  67-70
    二、重组痘苗病毒天坛株产生HCV病毒样颗粒特性研究  70-77
      2.1 材料与方法  70-72
      2.2 实验结果  72-75
      2.3 讨论  75-77
总结  77-78
参考文献  78-89
博士期间已发表和待发表论文  89-91
致谢  91-92

牛免疫缺陷病毒介导细胞膜融合机制研究及基于减毒重组痘苗病毒载体的丙型肝炎病毒疫苗策略研究

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