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中国林蛙抗菌肽RTCI的结构功能研究

作　者: 周杰
导　师: 李青山；滕利荣
学　校: 吉林大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 抗菌肽多重耐药菌中国林蛙增殖活性抗生素活菌数金黄色葡萄球菌抗菌活性抗菌机理氨基酸残基
分类号: Q51
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

抗菌肽属自然免疫的一部分,是生物体免疫防御的第一道防线,可以抑制微生物生长、阻止微生物入侵。本论文研究一种从中国林蛙皮肤中得到的抗菌肽RTCI。本研究从中国林蛙皮中纯化得到了一种具有特殊荧光性质的抗菌肽RTCI。研究了此抗菌肽针对多株吉林省内医院中分离的多重耐药菌的抗菌活性。结果表明此抗菌肽对多数实验菌株有很好的抑制/杀伤作用。并利用浓度依赖的杀菌进程与时间杀菌进程相结合的方法,研究了其抗菌机制。利用电子谱学、分子谱学等技术手段对其近生理条件下的结构特征进行了表征,证明此抗菌肽具有特殊的荧光性质,分析了产生此特殊荧光性质的分子结构基础。构建了中国林蛙皮cDNA文库,为深入研究蛙皮中所含有的低丰度、高活性肽类物质,以及具有特殊活性的肽类物质奠定基础。

全文目录

提要  4-11
第一章前言  11-26
  第一节抗生素研究的历史与现状  11-13
    1.1.1 抗生素的发现  11-12
    1.1.2 细菌耐药性的出现  12-13
    1.1.3 抗生素研究的现状与发展趋势  13
  第二节抗菌肽研究  13-24
    1.2.1 抗菌肽概述  13-14
    1.2.2 抗菌肽的物种来源  14-18
    1.2.3 抗菌肽的序列特征  18-21
    1.2.4 抗菌肽在合成来源上的分类  21
    1.2.5 抗菌肽的结构特征  21-23
    1.2.6 抗菌肽的抗菌机理  23
    1.2.7 抗菌肽同抗生素的比较  23-24
  第三节本研究的目的及意义  24-26
第二章实验材料与仪器  26-31
  2.1 材料  26-28
    2.1.1 林蛙  26
    2.1.2 菌种  26-28
      2.1.2.1 标准菌种  26
      2.1.2.2 临床多重耐药菌  26-28
  2.2 药品  28-29
  2.3 仪器  29-31
第三章抗菌肽的分离纯化  31-36
  3.1 引言  31-32
  3.2 实验过程  32-33
    3.2.1 抗菌肽的分离纯化  32
    3.2.2 活性测定  32-33
  3.3 结果和讨论  33-35
    3.3.1 抗菌组分的纯化及其抗菌活性测定  33
    3.3.2 SDS-PAGE 电泳  33-35
  3.4 讨论  35-36
第四章抗菌肽RTCI 对临床多重耐药菌的抗菌活性及抗菌机理研究  36-80
  4.1 引言  36
  4.2 实验方法  36-37
    4.2.1 MIC 测定  36
    4.2.2 Time-killer 测定  36-37
  4.3 实验结果与讨论  37-80
    4.3.1 细菌增殖活性抗菌肽浓度依赖关系研究  37-38
    4.3.2 Time-killer 研究  38-80
第五章抗菌肽的光谱研究  80-88
  5.1 引言  80
  5.2 实验过程  80-81
    5.2.1 氨基酸组成分析  80
    5.2.2 结构研究  80-81
      5.2.2.1 紫外-可见光谱和荧光光谱  80
      5.2.2.2 FT-IR 研究  80-81
      5.2.2.3 Raman 研究  81
      5.2.2.4 圆二色谱（near-UV CD）测定  81
  5.3 结果与讨论  81-88
    5.3.1 氨基酸组成分析  81
    5.3.2 结构研究  81-88
      5.3.2.1 紫外-可见光谱和荧光光谱  81-84
      5.3.2.2 FT-IR 光谱  84-85
      5.3.2.3 Raman 光谱研究  85-86
      5.3.2.4 RTCI 的圆二色谱  86-88
第六章林蛙皮cDNA 文库的构建  88-92
  6.1 引言  88
  6.2 实验材料  88
  6.3 实验方法  88-90
    6.3.1 蛙皮中总RNA 提取及mRNA 纯化  88-89
    6.3.2 cDNA 合成和重组载体的构建  89-90
  6.4 结果与讨论  90-92
    6.4.1 总RNA 的提取及产物质量  90
    6.4.2 mRNA 的分离、纯化  90-91
    6.4.3 cDNA 的合成、重组  91
    6.4.4 cDNA 文库的大小估算  91-92
第七章结论与展望  92-94
参考文献  94-108
攻读博士期间发表的学术论文及其他成果  108-109
中文摘要  109-112
Abstract  112-115
致谢  115

中国林蛙抗菌肽RTCI的结构功能研究

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