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γδT细胞抗原识别机制研究—含γδTCR CDR3δ序列嵌合抗体的构建及其抗原结合特异性和SARS相关冠状病毒B细胞抗原表位的筛选

作　者: 胡洪波
导　师: 何维；崔莲仙
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 免疫学
关键词: 嵌合抗体抗原识别毕业论文医科大学冠状病毒表位作图抗原特异性博士研究生协和交叉反应性
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

本论文分两部分：第一部分为γδT细胞抗原识别机制的研究。γδT细胞认为是天然免疫和获得性免疫之间的桥梁，广泛地参与到抗感染免疫、肿瘤免疫和自身免疫等各个方面。但迄今为止，只有少数的γδT细胞受体(T cell receptor，TCR)所识别的配体被鉴定，γδTCR抗原识别的具体细节尚不清楚。对三种抗原受体的结构和序列多样性的研究结果提示，αβTCR、γδTCR和抗体的识别抗原特异性主要决定于其互补决定区(complementarity determining regions，CDRs)；γδTCR在抗原识别上与αβTCR相差甚多而与抗体更类似，被认为是以“抗体类似”的方式与抗原结合。γδTCR和抗体整体结构比较以及δ链和抗体重链的CDR3长度和氨基酸多样性的比较提示，γδTCR的δ链和抗体重链在识别抗原中的作用类似；CDR3δ是γδTCR与抗原结合的重要部位。本课题组的前期工作证明，来源于卵巢癌的γδ肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes，TIL)δ链CDR3短肽OT3能特异性地结合肿瘤组织、肿瘤细胞系及其蛋白提取物和应激分子。为了进一步阐明γδTCR抗原识别的机制，本研究利用PCR搭桥技术，将抗体重链CDR3区用被OT3短肽的相应基因序列来替换，构建成嵌合抗体重链的重组基因片段，克隆到表达载体pNγ1中，转染到真核细胞中进行表达；筛选并大量培养阳性表达细胞以获得含γδTCR CDR3δ的嵌合抗体。利用流式细胞、激光共聚焦显微镜和表面等离子体共振(surface plasmon resonance，SPR)等技术对嵌合抗体的抗原结合特异性进行了研究，比较嵌合抗体与合成的OT3短肽在抗原识别特异性方面的差别，以阐明γδTCR抗原识别的机制及其结构基础。结果表明，含γδTCR CDR3δ的嵌合抗体可以与人卵巢癌细胞系SKOV3、HO8910和Hela等细胞及其蛋白提取物结合，与其他人类肿瘤细胞系及其蛋白提取物不结合或结合较弱，提示嵌合抗体的抗原结合性

全文目录

中文摘要  5-8
英文摘要  8-11
缩略词表  11-14
第一部分：γδT细胞抗原识别机制研究：含γδTCR CDR3δ序列嵌合抗体的构建及其抗原结合特异性  14-59
  一、前言  14-16
  二、材料与方法  16-34
  三、结果  34-50
  四、讨论  50-55
  五、结论  55-56
  六、参考文献  56-59
第二部分：应用合成的重叠肽库进行SARS病毒B细胞抗原表位的筛选和鉴定声明  59-96
  一、前言  59-61
  二、材料与方法  61-68
  三、结果  68-86
  四、讨论  86-93
  五、结论  93-94
  六、参考文献  94-96
文献综述  96-112
个人简历  112-114
致谢  114

γδT细胞抗原识别机制研究—含γδTCR CDR3δ序列嵌合抗体的构建及其抗原结合特异性和SARS相关冠状病毒B细胞抗原表位的筛选

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