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LPS模拟肽疫苗诱导保护性免疫应答的研究

作　者: 罗海波
导　师: 富宁
学　校: 第一军医大学
专　业: 免疫学
关键词: 脂多糖噬菌体随机肽库模拟肽交叉表位保护性免疫
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

脂多糖(lipopolysacchride,LPS)是引起多种感染性疾病的革兰氏阴性(G~-)菌重要的共同致病物质,可导致败血性休克等严重病理变化。鉴于G~-菌内毒素血症的高发病率和严重危害,针对LPS的治疗与预防的研究始终是人们极为关注的课题。目前尚无LPS或类脂A拮抗剂用于临床或进入临床观察;而在预防方面,预存抗LPS抗体与败血症的发生、大样本住院肿瘤患者、烧伤、外科手术等因感染死亡例数呈负相关的现象早已被证实,即对LPS诱发的病理进程有明确的保护作用,但这种保护力只限于对接种菌或特定血清型的LPS;而被动输入抗体则有时相限制,即感染前1小时内应用有效,这显然只适于动物实验。理想的LPS疫苗应能诱导再次免疫应答,所产生的抗体应是具广谱预防与保护作用。目前LPS疫苗研制所面临的主要困难包括:①LPS为TI-I(非胸腺依赖抗原-I)型抗原,自然诱导产生的抗体亲和力低、调理杀菌力弱,且无再次抗体应答,亦不能诱导特异性细胞免疫;②源于不同种属、不同株乃至不同血清型的LPS可具不同的抗原性,只能诱导产生与接种菌或LPS结合的抗体。因而至今尚无批准进入临床实验的具广谱保护作用的LPS疫苗。针对上述存在的问题,本课题的主要研究思路是:利用噬菌体肽库筛选获得的短肽模拟LPS的保守性结构表位,将其抗原表位的化学性质由脂多糖改变为短肽,由此使TI抗原改变为TD抗原,进而诱导机体内产生有效的再次抗体应答和交叉保护性免疫。本课题组在前期的工作中,从噬菌体肽库中筛选了数十个模拟位克隆,选择三个模拟鼠伤寒杆菌LPS表位的序列合成短肽,并证明用这三种模拟短肽免疫动物后,可诱发机体产生针对鼠伤寒杆菌LPS的抗体应答,但由于所获模拟位合成肽的免疫原性较弱,加之当时以BSA为载体,所产生的抗体效价较低,保护作用亦不明显。据此,本研究着重解决了具交叉保护性抗体的纯化,并以

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中文摘要  3-8
ABSTRACT  8-14
前言  14-18
第一章 LPS交叉保护性模拟位展示肽克隆的筛选  18-34
  1.1 材料与方法  18-26
    1.1.1 主要试剂  18-19
    1.1.2 主要溶液配制  19-22
    1.1.3 主要仪器与器材  22
    1.1.4 抗LPS 2630交叉反应性多克隆抗体的纯化及鉴定  22-23
    1.1.5 以纯化抗LPS多克隆抗体为靶对噬菌体环七肽库的筛选  23-24
    1.1.6 噬菌体克隆鉴定  24-26
  1.2 结果  26-31
    1.2.1 兔抗S.Typhi血清及纯化抗LPS 2630抗体与LPS的结合反应  26-27
    1.2.2 模拟LPS表位噬菌体环七肽克隆的获得  27
    1.2.3 噬菌体克隆与包被的抗LPS 2630多克隆抗体的结合  27-28
    1.2.4 抗L2630纯化多克隆抗体对噬菌体结合的抑制试验  28
    1.2.5 S.Typhi LPS 7261对噬菌体克隆与抗S.Typhi LPS多体结合的抑制  28-29
    1.2.6 阳性噬菌体克隆与多种属LPS多克隆抗体的结合  29-30
    1.2.7 DNA测序及氨基酸序列分析  30-31
  1.3 讨论  31-33
  1.4 小结  33-34
第二章合成模拟肽疫苗的制备及抗原性与免疫原性鉴定  34-61
  2.1 材料与方法  34-39
    2.1.1 主要试剂和溶液  34
    2.1.2 合成模拟肽的抗原性鉴定  34-35
    2.1.3 合成肽的免疫原性鉴定  35-39
  2.2 结果  39-55
    2.2.1 合成模拟肽的抗原性鉴定  39-42
    2.2.2 合成模拟肽的免疫原性鉴定  42-55
  2.3 讨论  55-60
  2.4 小结  60-61
第三章合成模拟肽疫苗诱导的保护性免疫反应  61-69
  3.1 材料与方法  61-62
    3.1.1 主要材料  61
    3.1.2 实验方法  61-62
  3.2 结果  62-66
    3.2.1 合成模拟肽免疫小鼠诱导的对鼠沙门氏菌攻击的保护  62-64
    3.2.2 合成模拟肽免疫小鼠诱导对内毒素性休克的保护  64-66
  3.3 讨论  66-68
  3.4 小结  68-69
全文总结  69-70
参考文献  70-75
缩略语词表  75-77
成果  77-78
  在读期间撰写及发表文章  77
  专利申请情况  77
  参与基金项目  77-78
致谢  78-79
南方医科大学学位论文原创性声明  79-80
学位论文版权使用授权书  80

LPS模拟肽疫苗诱导保护性免疫应答的研究

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