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烟酰胺对人皮黑素细胞的作用及其对UVA辐射后的干预

作　者: 帕它木·莫合买提
导　师: 金锡鹏；贾晓东
学　校: 复旦大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 黑素细胞 烟酰胺 UVA 黑素小体 黑素合成 黑素转运
分类号: R96
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要


黑素细胞中黑素生成量、产生黑素的类型、在黑素细胞中的分布、黑素生成后向角质形成细胞的输送和在胞内的分布和代谢,以及各种内源性因素和环境中的各种外界物理、化学刺激因素,均可导致人体皮肤色度的变化。虽然影响体内黑素合成及运输的因素繁多,黑素合成机制也较为复杂,但紫外线和化学物质是影响和调控肤色的两大主要因素。关于皮肤黑素转运的机制及外界不良因素的作用等对黑素沉着的影响机制,虽有众多的研究,但目前还所知不多。 近年来,UVB对黑素细胞的作用已被普遍公认,而长波紫外线UVA对人体皮肤健康的影响也日益受到研究者的重视。长波紫外线UVA对人皮黑素细胞的增殖作用。但少见使用化学物进行干预及其机制的探讨。国外有少量的研究表明烟酰胺对皮肤具有美白作用,有关它的作用机制却研究很少,这就关系着烟酰胺的合理利用和其药效的发挥。现有研究仅限于其对黑素含量和体外酪氨酸酶活性的影响;且烟酰胺使用剂量单一,不能全面评价其对人皮黑素细胞的作用,也未知其最低有效剂量和最大安全剂量;更不了解烟酰胺是否具有对UVA照射黑素细胞后的干预。 本研究第一部分以原代培养的人皮黑素细胞为对象,用烟酰胺为受试物,从烟酰胺对细胞功能的改变;烟酰胺对细胞中黑素合成和转运相关基因的表达水平的调控;对人皮黑素细胞中钙信号、细胞骨架的影响及对黑素小体运动速率和分布的作用这三个方面,分析烟酰胺对人皮黑素细胞黑素合成的作用特点,并探求其可能的作用机制。主要通过MTT实验、图像分析法和生化法测定黑素含量、RT—PCR、Western—blot印迹分析、荧光探针Flu—3AM流式细胞仪检测、活细胞time—lampse显微镜观察等实验方法进行研究。烟酰胺对黑素细胞的作用结果显示:1)烟酰胺在体外未显示对酪氨酸酶活性有抑制作用,而作用于黑素细胞120h后,1.25mg/ml浓度时,对黑素细胞内酪氨酸酶活性抑制作用明显;烟酰胺能够抑制人皮原代培养黑素细胞的增殖并呈剂量—效应关系、黑素细胞中黑素含量也显著减少;随着烟酰胺作用浓度的增加,细胞增殖指数逐渐降低,DNA指数也下降。2)烟酰胺在0.05mg/ml作用浓度时可以上调MITF基因的表达,使细胞内黑素转运基因Rab27a的表达减弱;黑素细胞中TYR基因和TRP-1基因的表达无显著改变。3)在烟酰胺浓度为0.05mg/ml和0.25mg/ml时,细胞功能正常的情况下,钙泵活性正常,能够调控细胞中的物质转运,而这时黑素细胞中Dynein

全文目录


中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-12
第一部分 烟酰胺对人皮黑素细胞黑素生成的作用研究  12-59
  第一节 人皮肤原代黑素细胞的培养  12-18
    1．材料与方法  12-13
    2．结果  13-16
    3．讨论  16-18
  第二节 烟酰胺对人皮肤黑素细胞的效应  18-35
    一．烟酰胺对人皮肤黑素细胞的短时效应  18-27
      1．材料与方法  18-20
      2．结果  20-25
      3．讨论  25-27
    二．烟酰胺对人皮肤黑素细胞的长时效应  27-35
      1．材料与方法  27-28
      2．结果  28-33
      3．讨论  33-35
  第三节 烟酰胺对人皮黑素细胞黑素转运基因表达的影响  35-45
    1．材料与方法  35-40
    2．结果  40-42
    3．讨论  42-45
  第四节 烟酰胺对人皮黑素细胞中钙信号、细胞骨架的影响和对黑素小体运动速率及分布的作用  45-59
    1．材料与方法  46-49
    2．结果  49-54
    3．讨论  54-59
第二部分 烟酰胺对长波紫外线UVA辐照黑素细胞的干预作用  59-87
  第一节 长波紫外线照射黑素细胞后烟酰胺对黑素合成的干预作用  61-69
    1．材料与方法  61-62
    2．结果  62-66
    3．讨论  66-69
  第二节 烟酰胺对长波紫外线照射黑素细胞黑素转运基因表达的干预  69-76
    1．材料与方法  69-70
    2．结果  70-74
    3．讨论  74-76
  第三节 烟酰胺对长波紫外线照射后人皮黑素细胞中钙信号的影响和对黑素小体运动速率及分布的干预  76-87
    1．材料与方法  76
    2．结果  76-83
    3．讨论  83-87
参考文献  87-95
综述  95-101
发表文章  101-103
致谢  103-105

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