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水通道蛋白1在小鼠内耳的超微结构定位及功能探讨

作　者: 林琳
导　师: 黄德亮；孙建和
学　校: 中国人民解放军军医进修学院
专　业: 耳鼻咽喉—头颈外科
关键词: 水通道蛋白小鼠:耳蜗免疫金标记
分类号: R764
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
下　载: 77次
引　用: 1次
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内容摘要

水通道蛋白(Aquaporin,AQP)的发现解决了生理学上一个长期存在的关于生物膜水通透性的问题,Peter Agre因此获得2003年诺贝尔奖。现认为生物膜的水转运同时存在简单扩散和通道介导两种机制,水通道蛋白是介导水分子的顺跨膜渗透压梯度快速转运的膜蛋白家族,在多种类型细胞的质膜上表达,现已从哺乳动物克隆了至少11种蛋白亚型(AQP0-10)。内、外淋巴液间的水转运对于调节内耳液体的容量和维持离子浓度具有重要意义。内淋巴液离子组成的变化,特别是体积的增加(内淋巴水肿),将引起内耳感觉功能的障碍,如梅尼埃病。目前为止在哺乳动物内耳已发现7种水通道蛋白亚型,其中AQP1在内耳分布最为广泛、表达量也较大。虽然在水通道各亚型中关于AQP1的基础、临床研究最为深入,但AQP1在内耳的精确定位及其功能仍不清楚,所以本研究首先选择研究AQP1的免疫组织化学定位、Western blot半定量分析及超微细胞化学定位,并进一步分析AQP1在内耳的功能。本研究首先应用冰冻切片免疫荧光染色法和两步法免疫组化(DAB染色)研究AQP1在小鼠内耳的组织分布情况,观察到AQP1表达在小鼠螺旋韧带紧靠骨壁的Ⅲ型纤维细胞区域、鼓阶和前庭阶的间皮细胞及内淋巴囊上皮下结缔组织等处。通过Western blot进一步证实AQP1在小鼠内耳耳蜗、前庭和内淋巴囊的表达,并半定量的分析出耳蜗内AQP1的表达量较在内淋巴囊的表达量多。为进一步分析AQP1在小鼠内耳的功能,本研究通过免疫电镜观察了AQP1在小鼠内耳组织细胞的超微结构定位。在此之前,本研究为兼顾细胞超微结构和抗原活性,通过配比预实验确定了免疫电镜实验时的最佳戊二醛和第一抗体浓度。研究结果显示:AQP1同时存在于螺旋韧带Ⅲ型纤维细胞靠近骨性胶原一侧的细胞膜和靠近腔面一侧的细胞膜上,特别在其丰富的细

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英文缩略词表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
前言  12-14
第一部分水通道蛋白1在小鼠内耳的表达  14-34
  材料  14-16
  实验方法  16-19
  结果  19-27
  讨论  27-30
  小结  30
  参考文献  30-34
第二部分水通道蛋白1在小鼠内耳的超微结构定位  34-68
  材料  34-36
  实验方法  36-41
  结果  41-58
  讨论  58-64
  小结  64-65
  参考文献  65-68
结论  68-70
文献综述  70-88
个人简历  88-90
致谢  90-92

水通道蛋白1在小鼠内耳的超微结构定位及功能探讨

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