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兔后囊膜混浊模型的建立及其分子机制研究

作　者: 陈启雷
导　师: 谭少健
学　校: 广西医科大学
专　业: 眼科学
关键词: 后囊膜混浊动物模型胞外信号调节激酶兔
分类号: R776
类　型: 博士论文
年　份: 2009年
下　载: 53次
引　用: 3次
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内容摘要

目的利用兔后囊膜混浊动物模型,明确后囊膜混浊(posterior capsule opacification,PCO)形成时间,进一步研究PCO发生及发展的分子机制以及胞外信号调节激酶(extracellular signal-reg-ulated kinase,ERK)信号传导通路的作用机制。方法取63只兔行右眼晶状体囊外摘除术(extra capsular lens extraction,ECLE),在术后各时间点裂隙灯显微镜下观察PCO发生情况及形态,检测后囊膜上增生细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达以明确PCO形成最早期和最显著期;在以上两个时间点检测术眼(最早期为A组,最显著期为B组)和对照眼(C组)的后囊膜上的连接素43(connexin 43,Cx43)及Ⅳ型胶原的表达以明LECs的增殖程度、细胞之间及其与细胞外基质(extracellular matrix ,ECM)的相互作用及影响;运用westorn blot法和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法测量基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases,MMP-2)、组织性金属蛋白酶抑制物-2(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-2)的基因及蛋白表达水平以明确两者在调节胶原的动态平衡中的作用;同法检测粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)、ERK1/2的基因及蛋白表达水平以了解在在PCO形成过程中ERK信号传导通路调控胶原分泌的作用机制。结果裂隙灯显微镜下发现术后1个月PCO开始形成,术后3个月PCO最为显著;后囊膜PCNA阳性表达最早为术后2周,最显著为术后3个月;Cx43检测发现C组表达阴性,A组的阳性率为31.52±4.68%,B组的阳性率为54.34±3.65%,t=13.3193,P<0.05,差异有统计学意义。Ⅳ型胶原检测发现C组表达阴性,A组OD值为0.203±0.032,B组OD值为0.477±0.085,t=10.4506,P<0.05,差异有统计学意义,MMP-2, TIMP-2蛋白表达的检测发现C组无MMP-2, TIMP-2蛋白表达;A组MMP-2OD值为45.28±2.57,B组OD值为26.74±3.26,t=13.3985,P<0.05,差异有统计学意义,MMP-2蛋白表达下降。A组TIMP-2OD值为22.46±3.15,B组OD值为32.14±2.92,t=6.7610,P<0.05,差异有统计学意义,TIMP-2蛋白表达升高。基因水平的检测发现MMP-2A组Ct值为23.40±0.66,B组值为17.70±0.60(图13);二者t检验比较有显著性差异(t=14.9522,P<0.05),MMP-2mRNA表达下降;TIMP-2A组Ct值为13.40±0.66;B组Ct值为19.27±0.82;二者t检验比较有显著性差异(t=9.3808,P<0.05),TIMP-2mRNA表达增强。FAK、ERK1/2蛋白表达的检测发现C组无FAK、ERK1/2蛋白表达;A组FAKOD值为24.68±3.12,B组OD值为32.58±3.17,t=5.3284,P<0.05,差异有统计学意义,FAK蛋白表达升高。A组ERK1/2OD值为30.46±3.25,B组OD值为43.52±4.17 ,t=7.4108,P<0.05,差异有统计学意义,ERK1/2蛋白表达升高。基因水平的检测发现FAK A组Ct值为16.77±0.45,B组值为24.77±0.85(图13);二者t检验比较有显著性差异(t=14.3942,P<0.05),FAK mRNA表达增强;ERK1A组Ct值为14.73±0.40;B组Ct值为21.40±0.79;二者t检验比较有显著性差异(t=12.9641,P<0.05),ERK1mRNA表达增强。结论兔ECLE手术后可成功建立后囊膜混浊模型;术后2周为PCO形成最早期,术后3月为PCO形成的最显著期;ERK信号传导通路在LECs调控ECM合成过程中起到重要作用:残留的LECs由于激活的ERK1/ 2产生异常的迁移,通过MAPK信号通路调控MMP-2及TIMP-2等因子的表达,使得ECM中的Ⅳ型胶原分泌增加,LECs黏附、增殖能力增强,促进了PCO的发生和发展。

全文目录

一、论文  5-68
  1、英文缩写中英文对照  5-6
  2、中文摘要  6-9
  3、英文摘要  9-12
  4、前言  12-14
  5、第一部分制作兔后发性白内障动物模型,确定活体内 PCO 形成的时间点  14-31
    5.1 材料和方法  14-19
    5.2 结果  19-22
    5.3 讨论  22-24
    5.4 结论  24-25
    5.5 参考文献  25-28
    5.6 附图  28-31
  6、第二部分 PCO 发生过程中 ERK 信号传导通路在 LECs 调控 ECM 合成机制的研究  31-68
    6.1 材料和方法  31-47
    6.2 结果  47-50
    6.3 讨论  50-58
    6.4 结论  58-59
    6.5 参考文献  59-62
    6.6 附图  62-68
二、文献综述  68-95
  1、文献综述  68-87
  2、参考文献  87-95
三、致谢  95

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