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RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响

作　者: 阚艳艳
导　师: 田永杰
学　校: 山东大学
专　业: 妇产科学
关键词: 卵巢肿瘤 小分子干扰RNA 耐药性，肿瘤 基因，PARP-1
分类号: R737.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


背景：上皮性卵巢癌(以下简称卵巢癌)以其症状不明显、早期发现率低、进展迅速以及生物学特性错综复杂,加之术后易复发、5年生存率徘徊在35%至40%之间,而成为目前女性生殖器恶性肿瘤中威胁最大的疾病。卵巢癌的耐药性问题是其临床治疗效果欠佳的主要原因之一。虽然在卵巢癌的标准化治疗方面已经取得了巨大进展,但对于卵巢癌的复发和耐药机制仍不明确。因此探索卵巢癌耐药的分子机制,寻找有效的耐药逆转剂或有效的治疗靶标已成为国内外妇科肿瘤学界密切关注的研究热点。目的：1.检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)在上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13*及其亲本的上皮性卵巢癌顺铂敏感细胞0V2008中的表达差异。2.构建含PARP1-siRNA的慢病毒载体,转染上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13*。3.检测转染外源性PARP-1小干扰RNA后对上皮性卵巢癌耐药细胞的影响。4.初步探讨PARP-1与卵巢癌耐药的关系。方法：1.应用四甲基偶氮哗蓝(MTT)法分别检测上皮性卵巢癌耐药细胞C13*和亲本细胞0V2008的IC50,计算耐药指数。2.采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenic quantitative PCR, RFQ-PCR)和Western印迹法检测C13*细胞及0V2008细胞中PARP-1基因mRNA及蛋白表达差异,并观察不同浓度顺铂作用24小时后基因的变化。3.应用siRNA抑制PARP-1基因后,通过RFQ-PCR和Western印迹法分析RNA干扰效果。4.MTT法检测转染后,细胞在顺铂作用下生存率的改变及对顺铂敏感性的变化。结果：1.C13*的耐药指数为3.96,可进行耐药实验。2.以顺铂耐药细胞C13*细胞中PARP-1基因的表达水平为100%,卵巢癌顺铂敏感细胞0V2008细胞中PARP-1 mRNA的表达为(47.23±3.97)%,蛋白质的表达为(52.82±2.53)%,并且在给予10μmol/L CDDP作用24h后,引起卵巢癌顺铂敏感细胞0V2008细胞中PARP-1蛋白含量明显下调(P<0.05),而顺铂耐药细胞C13*细胞中PARP-1蛋白的表达无明显影响(P>0.05)。3.特异性PARP1-siRNA能有效降低C13*细胞中PARP-1 mRNA及蛋白水平,分别下降(71.23±5.41)%和(73.84±3.78)%(P<0.05)。4.转染PARP1-siRNA后,C13*细胞对顺铂的半数抑制浓度(half inhibitory concentration, IC50)值下降(63.49±10.06)%,并且C13*细胞的生长活力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：PARP-1基因的功能检测表明,PARP-1在体外培养的卵巢癌耐药细胞中表达增高,其表达的上调与卵巢癌细胞顺铂耐药间存在相关性。在体外培养的卵巢癌细胞中应用小干扰RNA抑制PARP-1基因表达水平,能够在一定程度上减低卵巢癌细胞对顺铂的耐药性。提示PARP-1基因表达改变可能与卵巢癌细胞顺铂耐药相关。

全文目录


中文摘要  6-8
Abstract  8-10
符号说明  10-12
前言  12-14
材料和方法  14-31
结果  31-33
讨论  33-41
结论  41-42
附表  42-43
附图  43-45
参考文献  45-49
致谢  49-50
攻读硕士学位研究生期间发表的论文  50-51
个人简历  51-52
学位论文评阅及答辩情况表  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 卵巢肿瘤
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