学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
不同利用方式对红壤坡地硝化功能微生物多样性的影响
作 者: 张慧
导 师: 谭周进;魏文学
学 校: 湖南农业大学
专 业: 微生物学
关键词: 氨氧化细菌(AOB) 氨氧化古菌(AOA) T-RFLP 克隆
分类号: S154.3
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 94次
引 用: 1次
阅 读: 论文下载
内容摘要
本文采集了中国科学院桃源农业生态试验站红壤坡地农田、自然恢复和茶园土壤样品,采用DNA提取、PCR扩增、末端限制性酶切片段长度多态性分析(T-RFLP)技术、克隆文库构建等分子生物学技术研究不同利用方式对土壤氨氧化古菌和氨氧化细菌amoA基因多样性以及菌群组成的影响。结果表明,土壤氨氧化细菌(AOB)和氨氧化古菌(AOA)多样性指数差异不显著,且在3种不同十地利用方式中呈现相同的趋势,均为农田=茶园>自然恢复。通过RDA分析,发现不同利用方式造成土壤理化性状的改变是影响土壤AOA和AOB群落结构的主要原因。好气培养法测得不同土壤硝化势农田最高,茶园次之而自然恢复最低。相关性分析显示,硝化势与AOA和AOB amoA基因多样性指数呈显著正相关关系,其中与AOA amoA基因关系最为密切。与GenBank的数据比对结果显示克隆到的氨氧化古菌amoA基因主要与未培养的Crenarcheota(泉古菌门),其余的序列属于unclassified Archaea(未分类的古菌),克隆到的氨氧化细菌都属于Nitrosospira菌属。总体来说,红壤坡地不同利用方式改变了土壤AOA和AOB的多样性以及群落组成。并进一步证实土壤AOB和AOA积极参与了土壤的硝化过程,且AOA在氨氧化微生物群落生态功能中占有重要地位,AOA比AOB与硝化势的关系更为密切。
|
全文目录
摘要 4-5 Abstract 5-10 1 前言 10-17 1.1 研究目的与意义 10 1.2 国内外研究进展 10-14 1.2.1 不同土地利用方式对土壤氮流失的影响 10-11 1.2.2 不同环境对硝化功能微生物多样性的影响 11-12 1.2.3 土壤硝化作用过程及其功能基因 12 1.2.4 氨氧化细菌和氨氧化古菌在硝化过程中的作用 12-14 1.2.5 土壤微生物多样性研究方法进展 14 1.3 研究内容、研究方案与技术路 14-17 1.3.1 研究内容与目标 15 1.3.2 研究方案 15-16 1.3.3 技术路线 16-17 2 材料与方法 17-31 2.1 土壤样品 17-20 2.1.1 土壤样品背景 17-18 2.1.2 土壤样品采集与预处理 18-19 2.1.3 土壤理化性质测定 19-20 2.2 土壤DNA的提取 20-22 2.2.1 仪器与试剂 20-21 2.2.2 提取方法 21-22 2.3 氨氧化古菌(AOA)和氨氧化细菌(AOB)amoA基因的扩增及条件优化 22-24 2.3.1 仪器与试剂 22-23 2.3.2 方法 23 2.3.3 PCR扩增及条件优化 23-24 2.4 氨氧化古菌(AOA)和氨氧化细菌(AOB)amoA基因的酶切反应和T-RFLP检测 24-27 2.4.1 材料 24 2.4.2 方法 24-27 2.4.2.1 PCR产物纯化 24-25 2.4.2.2 酶切反应和T-RFLP检测 25-26 2.4.2.3 T-RFLP分析 26-27 2.5 氨氧化古菌(AOA)和氨氧化细菌(AOB)amoA基因的克隆与序列分析 27-30 2.5.1 材料 27 2.5.2 方法 27-30 2.5.2.1 PCR产物的纯化(同2.4.2.1) 27 2.5.2.2 克隆 27-29 2.5.2.3 测序及序列分析 29-30 2.5.2.4 文库分析 30 2.6 核苷酸序列登录号 30-31 3 结果与分析 31-46 3.1 土壤微生物总DNA提取 31-33 3.1.1 DNA的质量 31-32 3.1.2 DNA质量的检测 32-33 3.2 不同利用方式下氨氧化古菌和氨氧化细菌的多样性及组成 33-38 3.2.1 氨氧化古菌和氨氧化细菌的PCR扩增 33-34 3.2.2 T-RFLP分析氨氧化古菌和氨氧化细菌的多样性及组成 34-38 3.2.2.1 酶切检测 34 3.2.2.2 不同土地利用方式AOA和AOB多样性变化 34-35 3.2.2.3 不同利用方式对硝化势的影响 35 3.2.2.4 硝化势与多样性的关系 35-36 3.2.2.5 不同利用方式对AOA和AOB群落的影响 36-37 3.2.2.6 土壤理化性状对AOA和AOB分布的影响 37-38 3.3 克隆文库构建与系统发育树 38-46 3.3.1 目的基因片段的克隆与测序分析 38-39 3.3.2 文库分析 39-46 3.3.2.1 多样性指数分析 39 3.3.2.2 稀疏曲线、库容及优势种分析 39-41 3.3.2.3 文库显著性差异分析 41 3.3.2.4 系统发育树分析 41-46 4 讨论 46-49 4.1 土壤微生物总DNA提取 46 4.2 不同利用方式对氨氧化功能微生物多样性的影响 46-48 4.3 不同利用方式氨氧化古菌和氨氧化细菌amoA基因的系统发育分析 48-49 5 全文结论 49-50 参考文献 50-58 符号表 58-59 致谢 59-60 个人简历 60
|
相似论文
- 红肉脐橙和‘国庆四号’温州蜜柑中CHS和CHI基因的克隆与表达及其对类黄酮积累的调控机制,S666.4
- 南极冰藻GPx、GST和SAHH基因的克隆、定量分析及原核表达载体的构建,Q943.2
- 抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究,S482.2
- 草鱼呼肠孤病毒vp5、vp7基因cDNA的克隆、表达及VP5、VP7蛋白亚细胞定位研究,S941.41
- 草鱼呼肠孤病毒vp6和ns38基因的克隆、表达及VP6和NS38免疫原性研究,S941.41
- 军曹鱼生长激素基因(GH)的克隆和表达,Q786
- 企鹅珍珠贝Cd-MT酶联免疫检测方法的建立及试剂盒的初步研制,X835
- 甲型流感病毒M2蛋白的表达、纯化及其免疫原性的研究,R392
- 条纹斑竹鲨和鲫鱼BAFF基因的克隆和性质分析,S917.4
- Pseudomonas sp.RT-1低温脂肪酶发酵条件优化、纯化及基因的克隆表达,TQ925
- 棉铃虫和烟夜蛾生殖生物学特性比较研究,S433
- 红笛鲷清道夫受体B型Ⅰ类和抗冻蛋白Ⅱ型基因的克隆、表达与定量分析,S917.4
- STLV-1病毒间接ELISA方法建立及杂交瘤细胞株的筛选,R373
- Thermobifida Halotolerans YIM 90462~T木聚糖酶基因克隆表达以及酶学特性研究,Q78
- 棉铃虫NADPH-细胞色素P450还原酶基因的克隆、时空表达及RNA干扰,S435.622.3
- 害虫捕食性天敌拟环纹豹蛛烟碱型乙酰胆碱受体毒理学特性研究,S476.2
- 硅、硫对水稻砷吸收、积累的影响机制研究,S511
- 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
- 多菌灵降解菌的分离鉴定、生物学特性及多菌灵水解酶基因的克隆和表达研究,X172
- 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
- 烟草中NAC类转录因子基因的克隆与分析,Q943.2
中图分类: > 农业科学 > 农业基础科学 > 土壤学 > 土壤生物学 > 土壤微生物学
© 2012 www.xueweilunwen.com
|