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铁载体细菌对桃树缺铁黄化病的生物防治初步研究
作 者: 何苗
导 师: 黄云
学 校: 四川农业大学
专 业: 植物病理
关键词: 桃黄化病 铁载体产生菌 鉴定 诱变选育 定殖 生物防治
分类号: S436.621
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
桃树是重要的核果类果树,原产于我国,色、香、味俱佳且营养丰富,深受人们青睐。石灰性土壤上的桃树黄化病(Peach yellow disease)是一种对桃树危害较大的病害,严重影响桃树的生产,为防治该病害尝试过不少方法,但都不理想。微生物铁载体是一类能极强螯合Fe3+的小分子化合物,有研究表明,铁载体可促进植物生长,对改善植物的缺铁黄化也有一定作用。因此,利用铁载体防治桃树的缺铁黄化不失为一条可行的途径。本试验是对铁载体细菌的筛选鉴定、诱变选育以及对桃树缺铁黄化的生物防治初步研究,结果如下:1铁载体细菌的筛选及鉴定从桃树根际土壤中分离到81株细菌,通过CAS检测法筛选出一株产铁载体能力较强的细菌菌株MX-26,经形态特征鉴定、生理生化特征鉴定及16S rDNA序列分析,确定MX-26为克雷伯氏菌属Klebsiella Trevisan产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca。2铁载体细菌的诱变选育以细菌菌株MX-26作为出发菌株,对其进行紫外诱变,紫外和氯化锂复合诱变以及硫酸二乙酯(DES)诱变,得到的最佳诱变组合如下:紫外诱变的最佳照射时间为180s,氯化锂的最佳处理浓度为1.2%,DES最佳诱变时间为40min,诱变最终得到细菌菌株MX26-18,其产铁载体能力较出发菌提高了32.9%,且遗传性能比较稳定。3铁载体细菌的土壤定殖利用菌株MX26-18的抗利福平突变菌株,研究其在桃树根际土壤中的定殖能力,以灭菌土为对照。结果发现,MX26-18的菌量在桃树根际土壤中先呈下降趋势,45d菌量开始缓慢上升,60d时的菌量较初始菌量降低了一个数量级,但仍保持在104数量级,灭菌土中的菌株生长趋势与根际土壤中菌株生长情况基本一致,尽管60d时菌体数量较初始菌量减少近一半,但对比根际土壤中的菌量仍高出1个数量级,说明菌株MX26-18在根际土壤中的定殖力较好,在灭菌土中的定殖力要强于根际土壤里的定殖力。4铁载体细菌对桃树缺铁黄化的生物防治目前,国内尚无桃树缺铁黄化的生防研究报道,本研究首次从生物防治的角度,探索铁载体细菌对石灰性土壤上桃树缺铁黄化的防治效果。以雅安桃花山黄化桃树为试验对象,制备铁载体细菌的发酵液,施用于桃树黄化病株根部,清水对照,定期调查黄化桃树复绿情况。结果发现,铁载体细菌发酵液对病叶的复绿效果虽不明显,但对稳定黄化病情有一定程度的作用,因此利用铁载体细菌防治桃树缺铁黄化有其可行性,具体的防治方法还有待进一步研究。
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全文目录
摘要 4-6 Abstract 6-12 第一部分 文献综述 12-25 1 植物的缺铁性生理黄化病 12-13 1.1 缺铁对植物的危害 12 1.2 缺铁环境下植物的表现 12-13 1.2.1 外部表现 12 1.2.2 生理生化反应 12-13 1.3 缺铁环境下植物的适应机制 13 2 石灰性土壤上植物的缺铁性生理黄化病 13-16 2.1 影响石灰性土壤上植物缺铁性生理黄化病的因素 13-14 2.1.1 铁营养 14 2.1.2 土壤pH值 14 2.1.3 重碳酸盐浓度 14 2.1.4 土壤水分 14 2.2 石灰性土壤上植物缺铁性生理黄化病的防治 14-16 2.2.1 土壤施用 15 2.2.2 叶面喷施 15 2.2.3 树干注射 15 2.2.4 选用或靠接具有铁抗性的砧木品种 15 2.2.5 其他耕作方式 15-16 3 铁载体研究概况 16-22 3.1 铁载体的概念及类型 16-17 3.1.1 铁载体的概念 16 3.1.2 分泌铁载体微生物的种类及铁载体类型 16-17 3.2 影响微生物铁载体合成的因素 17-18 3.3 铁载体菌常用的研究方法 18-20 3.3.1 CAS检测法 18 3.3.2 光吸收法 18-19 3.3.3 生物检测法 19 3.3.4 其他物理检测法 19-20 3.4 铁载体菌的生防研究 20-21 3.5 铁载体菌的其他作用及应用 21-22 4 微生物的诱变育种研究 22-24 4.1 物理诱变剂 22 4.2 化学诱变剂 22-23 4.3 生物诱变剂 23 4.4 新型诱变剂 23-24 5 研究目的和意义 24-25 第二部分 材料和方法 25-33 1 材料 25 1.1 土壤采集 25 1.2 供试培养基 25 1.3 主要试剂和仪器 25 2 方法 25-33 2.1 桃树根际土壤细菌的分离 25-26 2.2 铁载体细菌的筛选 26-27 2.2.1 CAS定性检测 26 2.2.2 CAS定量检测 26-27 2.3 铁载体细菌的鉴定 27-29 2.3.1 形态观察 27 2.3.2 生理生化鉴定 27-29 2.3.3 16S rDNA序列测定 29 2.4 铁载体细菌的诱变选育 29-30 2.4.1 铁载体细菌生长曲线测定 29 2.4.2 紫外诱变 29 2.4.3 紫外和氯化锂复合诱变 29-30 2.4.4 化学诱变 30 2.5 铁载体突变菌株的筛选 30 2.6 铁载体细菌的土壤定殖 30-31 2.6.1 菌株抗利福平标记 30 2.6.2 土壤细菌在利福平培养基上的适应性测定 30-31 2.6.3 利福平标记菌株在桃树根际土壤中的定殖测定 31 2.7 铁载体细菌防治桃树缺铁黄化初探 31-33 2.7.1 桃树黄化病的症状观察 31 2.7.2 桃树黄化病情调查 31 2.7.3 铁载体细菌防治桃树缺铁性生理黄化病初探 31-33 第三部分 结果与分析 33-44 1 桃树根际土壤细菌的分离 33 2 产铁载体细菌的筛选 33-35 2.1 CAS定性检测 33-34 2.2 CAS定量检测 34-35 3 铁载体细菌的鉴定 35-36 3.1 形态鉴定 35 3.2 生理生化鉴定 35 3.3 16S rDNA序列测定 35-36 4 产铁载体细菌诱变选育 36-39 4.1 产铁载体细菌的生长曲线测定 36-37 4.2 紫外诱变 37 4.3 紫外和氯化锂复合诱变 37-38 4.4 化学诱变 38-39 5 铁载体突变菌株的筛选 39 5.1 突变株的筛选结果 39 5.2 遗传稳定性试验结果 39 6 铁载体细菌的土壤定殖 39-40 6.1 土壤细菌在利福平培养基上的适应性测定 39 6.2 诱变菌株MX26-18的土壤定殖情况 39-40 7 铁载体细菌防治桃树缺铁性生理黄化病初探 40-44 7.1 桃树黄化病病情调查 40-42 7.1.1 桃树黄化病的症状观察 40-42 7.1.2 黄化病情指数调查 42 7.2 铁载体细菌防治桃树缺铁性生理黄化病初探 42-44 第四部分 结论与讨论 44-47 1 铁载体细菌的筛选 44 2 铁载体细菌的鉴定 44-45 3 铁载体细菌的诱变选育 45 3.1 铁载体细菌生长曲线测定 45 3.2 铁载体细菌的诱变 45 4 铁载体细菌的土壤定殖 45-46 5 铁载体细菌防治桃树缺铁性生理黄化病初探 46-47 参考文献 47-56 致谢 56-57 攻读硕士期间发表的论文和出版教材 57
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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 园艺作物病虫害及其防治 > 果树病虫害 > 核果类病虫害 > 桃病虫害
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