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铁载体细菌对桃树缺铁黄化病的生物防治初步研究

作 者: 何苗
导 师: 黄云
学 校: 四川农业大学
专 业: 植物病理
关键词: 桃黄化病 铁载体产生菌 鉴定 诱变选育 定殖 生物防治
分类号: S436.621
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


桃树是重要的核果类果树,原产于我国,色、香、味俱佳且营养丰富,深受人们青睐。石灰性土壤上的桃树黄化病(Peach yellow disease)是一种对桃树危害较大的病害,严重影响桃树的生产,为防治该病害尝试过不少方法,但都不理想。微生物铁载体是一类能极强螯合Fe3+的小分子化合物,有研究表明,铁载体可促进植物生长,对改善植物的缺铁黄化也有一定作用。因此,利用铁载体防治桃树的缺铁黄化不失为一条可行的途径。本试验是对铁载体细菌的筛选鉴定诱变选育以及对桃树缺铁黄化的生物防治初步研究,结果如下:1铁载体细菌的筛选及鉴定从桃树根际土壤中分离到81株细菌,通过CAS检测法筛选出一株产铁载体能力较强的细菌菌株MX-26,经形态特征鉴定、生理生化特征鉴定及16S rDNA序列分析,确定MX-26为克雷伯氏菌属Klebsiella Trevisan产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca。2铁载体细菌的诱变选育以细菌菌株MX-26作为出发菌株,对其进行紫外诱变,紫外和氯化锂复合诱变以及硫酸二乙酯(DES)诱变,得到的最佳诱变组合如下:紫外诱变的最佳照射时间为180s,氯化锂的最佳处理浓度为1.2%,DES最佳诱变时间为40min,诱变最终得到细菌菌株MX26-18,其产铁载体能力较出发菌提高了32.9%,且遗传性能比较稳定。3铁载体细菌的土壤定殖利用菌株MX26-18的抗利福平突变菌株,研究其在桃树根际土壤中的定殖能力,以灭菌土为对照。结果发现,MX26-18的菌量在桃树根际土壤中先呈下降趋势,45d菌量开始缓慢上升,60d时的菌量较初始菌量降低了一个数量级,但仍保持在104数量级,灭菌土中的菌株生长趋势与根际土壤中菌株生长情况基本一致,尽管60d时菌体数量较初始菌量减少近一半,但对比根际土壤中的菌量仍高出1个数量级,说明菌株MX26-18在根际土壤中的定殖力较好,在灭菌土中的定殖力要强于根际土壤里的定殖力。4铁载体细菌对桃树缺铁黄化的生物防治目前,国内尚无桃树缺铁黄化的生防研究报道,本研究首次从生物防治的角度,探索铁载体细菌对石灰性土壤上桃树缺铁黄化的防治效果。以雅安桃花山黄化桃树为试验对象,制备铁载体细菌的发酵液,施用于桃树黄化病株根部,清水对照,定期调查黄化桃树复绿情况。结果发现,铁载体细菌发酵液对病叶的复绿效果虽不明显,但对稳定黄化病情有一定程度的作用,因此利用铁载体细菌防治桃树缺铁黄化有其可行性,具体的防治方法还有待进一步研究。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-12
第一部分 文献综述  12-25
  1 植物的缺铁性生理黄化病  12-13
    1.1 缺铁对植物的危害  12
    1.2 缺铁环境下植物的表现  12-13
      1.2.1 外部表现  12
      1.2.2 生理生化反应  12-13
    1.3 缺铁环境下植物的适应机制  13
  2 石灰性土壤上植物的缺铁性生理黄化病  13-16
    2.1 影响石灰性土壤上植物缺铁性生理黄化病的因素  13-14
      2.1.1 铁营养  14
      2.1.2 土壤pH值  14
      2.1.3 重碳酸盐浓度  14
      2.1.4 土壤水分  14
    2.2 石灰性土壤上植物缺铁性生理黄化病的防治  14-16
      2.2.1 土壤施用  15
      2.2.2 叶面喷施  15
      2.2.3 树干注射  15
      2.2.4 选用或靠接具有铁抗性的砧木品种  15
      2.2.5 其他耕作方式  15-16
  3 铁载体研究概况  16-22
    3.1 铁载体的概念及类型  16-17
      3.1.1 铁载体的概念  16
      3.1.2 分泌铁载体微生物的种类及铁载体类型  16-17
    3.2 影响微生物铁载体合成的因素  17-18
    3.3 铁载体菌常用的研究方法  18-20
      3.3.1 CAS检测法  18
      3.3.2 光吸收法  18-19
      3.3.3 生物检测法  19
      3.3.4 其他物理检测法  19-20
    3.4 铁载体菌的生防研究  20-21
    3.5 铁载体菌的其他作用及应用  21-22
  4 微生物的诱变育种研究  22-24
    4.1 物理诱变剂  22
    4.2 化学诱变剂  22-23
    4.3 生物诱变剂  23
    4.4 新型诱变剂  23-24
  5 研究目的和意义  24-25
第二部分 材料和方法  25-33
  1 材料  25
    1.1 土壤采集  25
    1.2 供试培养基  25
    1.3 主要试剂和仪器  25
  2 方法  25-33
    2.1 桃树根际土壤细菌的分离  25-26
    2.2 铁载体细菌的筛选  26-27
      2.2.1 CAS定性检测  26
      2.2.2 CAS定量检测  26-27
    2.3 铁载体细菌的鉴定  27-29
      2.3.1 形态观察  27
      2.3.2 生理生化鉴定  27-29
      2.3.3 16S rDNA序列测定  29
    2.4 铁载体细菌的诱变选育  29-30
      2.4.1 铁载体细菌生长曲线测定  29
      2.4.2 紫外诱变  29
      2.4.3 紫外和氯化锂复合诱变  29-30
      2.4.4 化学诱变  30
    2.5 铁载体突变菌株的筛选  30
    2.6 铁载体细菌的土壤定殖  30-31
      2.6.1 菌株抗利福平标记  30
      2.6.2 土壤细菌在利福平培养基上的适应性测定  30-31
      2.6.3 利福平标记菌株在桃树根际土壤中的定殖测定  31
    2.7 铁载体细菌防治桃树缺铁黄化初探  31-33
      2.7.1 桃树黄化病的症状观察  31
      2.7.2 桃树黄化病情调查  31
      2.7.3 铁载体细菌防治桃树缺铁性生理黄化病初探  31-33
第三部分 结果与分析  33-44
  1 桃树根际土壤细菌的分离  33
  2 产铁载体细菌的筛选  33-35
    2.1 CAS定性检测  33-34
    2.2 CAS定量检测  34-35
  3 铁载体细菌的鉴定  35-36
    3.1 形态鉴定  35
    3.2 生理生化鉴定  35
    3.3 16S rDNA序列测定  35-36
  4 产铁载体细菌诱变选育  36-39
    4.1 产铁载体细菌的生长曲线测定  36-37
    4.2 紫外诱变  37
    4.3 紫外和氯化锂复合诱变  37-38
    4.4 化学诱变  38-39
  5 铁载体突变菌株的筛选  39
    5.1 突变株的筛选结果  39
    5.2 遗传稳定性试验结果  39
  6 铁载体细菌的土壤定殖  39-40
    6.1 土壤细菌在利福平培养基上的适应性测定  39
    6.2 诱变菌株MX26-18的土壤定殖情况  39-40
  7 铁载体细菌防治桃树缺铁性生理黄化病初探  40-44
    7.1 桃树黄化病病情调查  40-42
      7.1.1 桃树黄化病的症状观察  40-42
      7.1.2 黄化病情指数调查  42
    7.2 铁载体细菌防治桃树缺铁性生理黄化病初探  42-44
第四部分 结论与讨论  44-47
  1 铁载体细菌的筛选  44
  2 铁载体细菌的鉴定  44-45
  3 铁载体细菌的诱变选育  45
    3.1 铁载体细菌生长曲线测定  45
    3.2 铁载体细菌的诱变  45
  4 铁载体细菌的土壤定殖  45-46
  5 铁载体细菌防治桃树缺铁性生理黄化病初探  46-47
参考文献  47-56
致谢  56-57
攻读硕士期间发表的论文和出版教材  57

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 园艺作物病虫害及其防治 > 果树病虫害 > 核果类病虫害 > 桃病虫害
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