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比重法测量脑组织含水量方法学及窒息大鼠心肺复苏后脑组织AQP4表达变化的研究

作 者: 肖盐
导 师: 刘励军
学 校: 苏州大学
专 业: 急诊医学
关键词: 比重法 脑组织含水量 密度法 心肺复苏 NMDA受体 艾芬地尔 水通道蛋白-4
分类号: R459.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2008年
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内容摘要


第一部分比重法测量脑组织含水量方法学及其影响因素的研究目的:建立液体比重柱测量脑组织含水量;探讨比重柱法测量脑组织含水量的影响因素。方法:制备液体比重柱:用溴苯和煤油配制所需混合液A的比重为0.975,混合液B为比重1.065,并用其各100ml制备液体比重柱,稳定15分钟后进行标定。用干燥的硫酸钾粉剂配制成比重分别为1.045、1.040、1.030和1.025的四种标准比重液100ml。使用微量加样器将5μl的标准液,在1分钟末分别读取液滴中心在比重柱中的高度。根据标准液的比重和在比重柱中的高度,建立线性方程,并根据此方程将组织样本在比重柱中的高度转换成组织比重(SGt)。选用10只SD大鼠,麻醉大鼠,在手术结束后使用氯化钾静脉注射处死大鼠。迅速开颅剥去脑膜后,放置在事先置于冰块上的培养皿中。分别取左右脑组织用比重柱行比重测定,并算出其组织比重,并将剩余的脑组织称量干湿重,根据Nelson公式算出脑含水量。结果:1.使用配制的混合液灌注10个比重柱,高度-比重相关性的指标—决定系数(coefficient of determination),γ均≥0.999,表明本试验制作的液体比重柱的稳定性和梯度均匀性均较佳。2.实验结果表明大鼠左右两侧的含水量基本对称,相应脑区的BWC无明显差别。结论:1.本研究制备的液体比重柱具有良好的稳定性和梯度均匀性,理论上可检测出±0.1%组织含水量的变化。2.本实验低温采集标本简化步骤且减少误差,且显示比重法检测组织含水量所需样本量小,并有敏感度和准确性较高的特点。第二部分心肺复苏后大鼠脑组织水通道蛋白-4及其mRNA的动态变化及艾芬地尔对其影响的研究目的:探讨复苏后早期脑水肿的变化规律,AQP4及其mRNA在脑水肿发生、发展中的作用,以及艾芬地尔减轻心肺复苏后脑水肿的可能机制。方法:雄性SD大鼠78只,随机分为3组,分别为对照组、复苏组、NMDA治疗组,后两组各自进一步分为3个亚组,即自主循环恢复后1、3和6小时组。建立窒息大鼠心肺复苏模型,应用比重柱法测定自主循环恢复后1、3和6小时脑组织含水量的变化;同时观察各时间点脑组织形态学的变化。利用免疫组织化学染色半定量分析的方法,检测相同观察时点脑组织AQP4表达水平的变化。运用RT-PCR方法检测脑组织AQP4mRNA表达的变化,分析AQP4、AQP4mRNA与BWC的相关性。结果:1.复苏组大鼠,ROSC后1hBWC开始增加,随着时间的延长BWC明显增加,各观察时点BWC与对照组比较,均有显著性差异(P值<0.05)。脑组织形态学的变化与以上结果相符。同时,复苏后脑组织AQP4蛋白水平、AQP4mRNA的表达,也呈现出与BWC变化几乎相同的趋势。相关分析表明,BWC与脑组织AQP4、AQP4mRNA水平表达呈明显正相关,相关系数(r)分别为0.680和0.569(P<0.05)。2.NMDA治疗组大鼠1小时BWC和脑组织AQP4表达水平与复苏组同一观察时点比较BWC开始减少,随着时间的延长3,6小时BWC和脑组织AQP4明显减少,且两者各观察时点与复苏组比较,均有显著性差异(P值<0.05);相关分析表明,艾芬地尔作用6h内,BWC与脑组织AQP4、AQP4mRNA表达水平呈明显正相关,r分别为0.541和0.587(P<0.05)。结论:1.心肺复苏后1h已出现脑水肿,并随着ROSC时间点的延长,脑水肿逐渐加重。2.脑组织AQP4及其mRNA在ROSC后1h表达上调,并随着ROSC时间点的延长,逐渐增高,脑水肿严重程度和AQP4、AQP4mRNA均呈现明显正相关。提示AQP4mRNA可能通过调节AQP4表达,参与了心肺复苏后脑水肿的过程。3.ROSC后艾芬地尔干预可减轻脑水肿,其机制可能和艾芬地尔抑制AQP4mRNA,下调AQP4的表达有关。

全文目录


中文摘要  3-6
Abstract  6-10
引言  10-13
第一部分 比重法测量脑组织含水量方法学及其影响因素的研究  13-22
  材料与方法  13-17
  结果  17-18
  讨论  18-20
  小结  20-21
  参考文献  21-22
第二部分 心肺复苏后大鼠脑组织含水量和水通道蛋白-4的动态变化及艾芬地尔对其影响的研究  22-46
  材料与方法  22-27
  结果  27-41
  讨论  41-43
  小结  43
  参考文献  43-46
结论  46-47
附图  47-53
综述  53-61
英文缩略语与中文对照  61-62
攻读学位期间发表文章  62-63
致谢  63-64
详细摘要  64-68

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中图分类: > 医药、卫生 > 临床医学 > 治疗学 > 急症、急救处理
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