学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

Ⅱ型限制性内切酶pstI在合成生物学中的应用

作　者: 舒伟良
导　师: 陈国强
学　校: 汕头大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 合成生物学最小基因组无核细胞底盘 PstI
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 40次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本论文是以研究PstI限制性内切酶对宿主基因组的影响为目的。把带有PstI基因的质粒转入到RosettaTM菌中,在30 oC条件下加入终浓度为1 mM IPTG诱导表达PstI内切酶,通过体外酶切实验证实,产生的PstI蛋白具有正常的II型限制性内切酶功能。经研究发现产生的PstI内切酶可以将宿主基因组切开,被切开的基因组随后会被DNA酶降解,最后可以得到没有基因组的细菌空壳。在诱导3小时后,用DAPI进行染色,在激光共聚焦显微镜下观察的结果说明Rosetta^TM菌的基因组被完全降解。因此使用这个方法可以得到一个不含基因的蛋白系统和一个完好的细菌外壳。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-7
第一章前言  7-19
  1.1 合成生物学研究进展  7-12
  1.2 限制修饰系统概述  12-17
  1.3 PET 表达系统  17
  1.4 本课题的研究目的及研究内容  17-19
第二章材料与方法  19-33
  2.1 实验材料  19-24
    2.1.1 菌种和质粒  19-20
    2.1.2 分子生物学常用的工具酶  20
    2.1.3 常用试剂盒  20
    2.1.4 常用生化试剂  20-22
    2.1.5 常用的分子量标准  22
    2.1.6 聚合酶链式反应（PCR）试剂  22-23
    2.1.7 实验所用仪器  23-24
  2.2 实验方法  24-33
    2.2.1 菌种保存方法  24
    2.2.2 常用培养基的配制  24
    2.2.3 分子生物学常用溶液及缓冲液的配制  24-25
    2.2.4 分子生物学常规操作  25
    2.2.5 PCR 方法  25-26
    2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化  26-27
    2.2.7 诱导表达  27
    2.2.8 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）  27-30
    2.2.9 细菌总蛋白裂解液的制备  30
    2.2.10 纯化目的蛋白  30-31
    2.2.11 蛋白质含量的测定  31
    2.2.12 活菌计数方法  31-32
    2.2.13 显微镜观察  32-33
第三章结果与分析  33-43
  3.1 pET28a-pstI 质粒的构建  33-35
    3.1.1 pstI 基因的获得  34
    3.1.2 pET28a 质粒经HindIII/BamHI 双酶切获得载体片段  34-35
    3.1.3 验证重组子的正确性  35
  3.2 pET28a-pstI 质粒在RosettaTM 菌中的表达  35-43
    3.2.1 利用His-标签纯化PstI 蛋白  36-37
    3.2.2 在体外验证纯化得到的PstI 蛋白的活性  37
    3.2.3 pET28a-pstI 质粒表达后对RosettaTM 宿主生长的影响  37-40
    3.2.4 pET28a-pstI 质粒表达后对宿主基因组的影响  40-43
第四章讨论  43-46
第五章结论  46-47
参考文献  47-56
个人简历及发表的学术论文  56-57
致谢  57

Ⅱ型限制性内切酶pstI在合成生物学中的应用

内容摘要

全文目录

相似论文