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蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）多糖的制备和In vitro抗肿瘤活性研究

作　者: 盛建春
导　师: 胡秋辉
学　校: 南京农业大学
专　业: 发酵工程
关键词: 蛋白核小球藻多糖提取膜分离结构分析抗肿瘤活性
分类号: R73-36
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

论文优化了超声波辅助提取蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)多糖的工艺，采用膜分离技术对多糖进行初步分离，根据带电性质和分子量采用DEAE C-52和Sephadex G-100纯化出不同的多糖组分，研究了两个多糖组分CPPSⅠa和CPPSⅡa的结构及其In vitro抗肿瘤活性。主要研究结果如下：1．本研究确定的多糖最佳提取条件为：温度68℃，时间55 min，超声波功率200W，料液比1：20，提取次数2次，多糖的得率为3．52％，纯度为44．44％。在相同条件下，不运用超声波，多糖的得率为1．92％，运用超声波技术使多糖得率增加近1倍。2．三氯乙酸结合微滤(0．1μm)技术可以使蛋白清除率达到83．30％，显著高于相同条件下用三氯乙酸的51．64％。通过对超滤膜孔径的筛选，确定截留分子量分别为30kDa和1 kDa的膜。优化超滤过程中的最佳工艺参数，分别为操作压力为11 psi，温度40℃，时间1．5 h。DEAE C-52和Sephadex G-100纯化得到2个单一多糖组分CPPSⅠa，CPPSⅡa。3．红外光谱解析表明CPPSⅠa，CPPSⅡa呈现出多糖的特征吸收峰，均为吡喃糖且以β-构型为主。HPLC法测定了CPPSⅠa，CPPSⅡa的峰值分子量(Mp)分别为69658 Da，109408 Da。气相色谱法分析表明CPPSⅠa，CPPSⅡa均由D-鼠李糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖组成，摩尔比分别为：2．21：1：2．13：5．48和3．27：1．20：1：2．11。另外在CPPSⅠa，CPPSⅡa中均含有一种未知多糖，相对百分含量分别为10．45％和26．71％。CPPSⅠa，CPPSⅡa对人肺癌细胞A549的In vitro生长抑制作用呈剂量依赖关系，在1 mg／mL时，抑制率分别为68．70％和49．50％。

全文目录

中文摘要  7-8
英文摘要  8-10
第一章文献综述-海藻多糖的提取纯化、结构分析及生物活性研究进展  10-21
  1.1 海藻的研究概况  10
  1.2 海藻多糖的研究进展  10-19
    1.2.1 海藻多糖的提取、分离、纯化方法  11-13
    1.2.2 海藻多糖的结构分析  13-15
      1.2.2.1 海藻多糖的结构分类  13-14
      1.2.2.2 海藻多糖的结构分析方法  14-15
    1.2.3 海藻多糖的生物活性研究  15-19
      1.2.3.1 抗病毒  15-16
      1.2.3.2 抗肿瘤  16-17
      1.2.3.3 抗氧化  17-18
      1.2.3.4 免疫调节活性  18-19
      1.2.3.5 抗凝血  19
      1.2.3.6 降血脂  19
  1.3 小球藻的研究进展  19-20
  1.4 本论文的主要研究内容  20
  1.5 本论文的研究意义  20-21
第二章蛋白核小球藻多糖的超声波辅助提取技术研究  21-29
  2.1 材料与方法  21-22
  2.2 结果与讨论  22-28
    2.2.1 蛋白核小球藻原料的成分组成  22-23
    2.2.2 时间对小球藻粗多糖得率的影响  23
    2.2.3 温度对小球藻多糖得率的影响  23-24
    2.2.4 功率对小球藻多糖得率的影响  24
    2.2.5 料液比对小球藻多糖得率的影响  24-26
    2.2.6 提取次数对小球藻多糖得率的影响  26
    2.2.7 小球藻多糖提取正交实验结果  26-28
  2.3 本章小结  28-29
第三章蛋白核小球藻多糖的膜分离及其纯化技术研究  29-45
  3.1 材料与方法  29-34
  3.2 结果与讨论  34-44
    3.2.1 不同浓度的三氯乙酸去蛋白效果比较  34
    3.2.2 三氯乙酸结合微滤除蛋白效果  34-35
    3.2.3 超滤膜的选择  35-36
    3.2.4 30 kDa的膜分离条件选择结果  36-38
    3.2.5 1 kDa的膜分离条件选择结果  38-39
    3.2.6 两道膜超滤结果  39-40
    3.2.7 30k CPPS和1k CPPS的DEAE C-52分离结果  40-42
    3.2.8 CPPS Ⅰ和CPPS Ⅱ的Sephadex G-100纯化结果  42-43
    3.2.9 CPPS 1 Sephadex G-100纯化结果  43
    3.2.10 小球藻多糖的紫外扫描曲线  43-44
  3.3 本章小结  44-45
第四章 CPPS Ⅰa和Ⅱa的结构分析及In vitro抗肿瘤活性研究  45-54
  4.1 材料与方法  45-47
  4.2 结果与讨论  47-52
    4.2.1 CPPS Ⅰa和CPPS Ⅱa的红外光谱分析  47-48
    4.2.2 CPPS Ⅰa和CPPS Ⅱa分子量测定  48-50
    4.2.3 CPPS Ⅰa和CPPS Ⅱa的单糖组成分析  50-51
    4.2.4 CPPS Ⅰa和CPPS Ⅱa对A549的In vitro抑制作用  51-52
  4.3 本章小结  52-54
全文结论  54-55
参考文献  55-62
在读期间已发表与录用论文  62-64
致谢  64

蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）多糖的制备和In vitro抗肿瘤活性研究

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