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野罂粟水煎剂对番泻叶致泻小鼠止泻作用的机理研究

作　者: 刘素芳
导　师: 于世瀛
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中西医结合基础
关键词: 野罂粟水煎剂止泻腹泻指数炎症反应肠上皮细胞
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 242次
引　用: 5次
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内容摘要

腹泻既是一种独立的疾病,又是多种疾病病理进程中的一个症状。统计表明,我国每年有8.36亿人次患腹泻,因此卫生部把腹泻列为我国重点防治的疾病之一。现代医学研究表明,腹泻病因诸多、病机复杂,其发病基础是胃肠道的分泌、消化、吸收和运动等障碍,使分泌量增加,食物不能完全分解,吸收量减少和肠胃蠕动加速等所致。其中,炎症介质是一类致泻性自体活性物质,临床所见的多数腹泻性疾病(包括感染性和非感染性)大多是由于致病因子使肠道发生炎症,释放出各种炎症介质造成的。因此,抗腹泻药物可通过抗炎,如抑制炎症的发生、发展或炎症介质的合成、释放,产生止泻效果。野罂粟( Papaver nudicaule L.)为罂粟科罂粟属多年生草本双子叶植物,用于止泻在北方各少数民族中沿用已久,在以往的研究中发现,野罂粟蒴果和全草的水提物具有止泻作用强,发挥作用迅速,能迅速缓解甚至消除腹泻及伴随症状—腹痛,与同类药物比较在不改变胃肠菌群环境而发挥抗腹泻作用方面具有明显的优势。因此从现代科学角度深入研究和揭示民族医药的物质基础、作用机理,将对民族医药的研发、生产和临床使用产生重要影响。本实验研究探讨野罂粟水煎剂抗腹泻的作用机理,集中于其对肠上皮细胞的保护作用以及止痛抗炎作用的研究。研究内容包括文献综述和实验研究两个部分。文献综述部分讨论了中医药防治急慢性腹泻的研究概况以及民族医药野罂粟止泻作用的研究进展。实验研究部分采用番泻叶灌胃制造出小鼠腹泻模型,研究野罂粟水煎剂对腹泻小鼠的行为学,小鼠小肠的形态学、病理学方面改变的影响及血清中白细胞介素-1(IL-1β)的含量和组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达,以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及其对肠上皮细胞的影响。实验研究结果如下:1.野罂粟水煎剂对腹泻小鼠的行为学及小肠黏膜组织病变的影响小鼠在灌胃番泻叶的第四天均不同程度的出现明显的腹泻,表现为便次增多,便质稀软。到第七天时小鼠呈明显的消瘦状态,且皮毛污秽并出现了倦怠乏力,精神萎靡,厌食等症状,腹泻现象也明显加剧。药物干预3天后,各给药组的小鼠腹泻症状明显改善,表现为便数减少,便质由稀水样转为粘稠,精神状态良好,饮食正常,情绪稍见兴奋,体重增加不明显。HE染色,光镜下观察:正常小肠组织结构清晰完整,粘膜排列规则整齐。绒毛上皮吸收细胞胞浆丰富,淡染,胞核位于基部,呈椭圆形,核仁清楚,相邻细胞顶部有完善的紧密连接。杯状细胞数目较少,散在分布。固有层内未见淋巴细胞等炎细胞浸润。腹泻模型组小肠外观均有不同程度的粘膜充血、水肿、肠腔变大增粗现象。病理切片显示,小肠粘膜肿胀,绒毛脱落,失去小肠正常结构,上皮细胞水肿,细胞间连接结构出现缺损。杯状细胞明显增多,大量淋巴细胞浸润。各给药组小鼠肠道组织的充血、水肿情况均有改善。小肠黏膜轻度肿胀,绒毛基本无脱落、结构清晰,少量或无淋巴细胞浸润。2.野罂粟水煎剂对腹泻过程中炎症反应的干预作用胃肠道不仅是消化器官,也是重要的免疫器官。当免疫功能发生异常时,如过渡免疫应答或免疫耐受,将会导致各种胃肠道疾病,可引起机体免疫功能失衡。而TNF-α和IL-1β是机体免疫调节网络中的基本细胞因子,参与机体多种组织细胞的生长分化和功能调节,在免疫和炎症反应中发挥重要作用。炎症细胞因子水平的升高,可进一步激发炎症进程,引起肠黏膜的损伤,出现黏膜充血水肿,甚至糜烂、出血。由于TNF-α和IL-1β均具有强烈的致炎活性,可直接作用于血管内皮细胞,使其通透性增加,导致肠壁大量渗出,故高水平的TNF-α和IL-1β在一定程度上可反映肠壁通透性增加,并可导致一系列的腹泻症状发生。本实验依据腹泻发生时炎症反应的特点,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫组织化学的方法,通过定量和定性的分析血清和组织中的IL-1β和TNF-α的水平变化来说明野罂粟水煎剂对腹泻过程中炎症反应的抑制作用。实验结果显示,腹泻模型组小鼠血清中的IL-1β含量与正常组相比明显升高;小肠组织切片中的TNF-α阳性表达也显著增加。而野罂粟各个治疗组小鼠血清中的IL-1β含量较模型组明显降低;同时TNF-α表达出的棕黄色颗粒较模型组也明显减少。说明野罂粟能够抑制腹泻过程中IL-1β和TNF-α的表达,减轻腹泻中的炎症反应,改善腹泻症状并减轻腹痛。这可能是野罂粟能有效止泻的作用机理之一。3.野罂粟水煎剂对腹泻小鼠肠上皮细胞的保护作用白细胞的过度激活是腹泻病理过程中的一个重要环节,ICAM-l作为免疫调节因子,通过受配体相互作用,介导白细胞不同亚群间的接触和粘附,调节白细胞的功能活性和免疫反应。严重腹泻可引起肠粘膜损伤,肠通透性增加,肠屏障功能障碍。而且近年来研究发现,增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)可反映肠粘膜上皮细胞的增殖状况,对肠粘膜的增殖和修复有重要的意义。本实验用免疫组织化学的方法分别探讨野罂粟水煎剂对腹泻小鼠肠道组织中的ICAM-1和PCNA表达的影响。结果发现,模型组的ICAM-1较正常组表达明显增多。野罂粟各组与模型组比较表达均有减少,以野罂粟高剂量组最为显著。模型组的PCNA表达与正常组比较明显增多,野罂粟各组与模型组比较亦有不同程度的表达进一步增多。综合分析以上各个作用环节可以得出结论:野罂粟水煎剂一方面能够显著抑制腹泻过程中炎症因子IL-1β、TNF-α等炎症介质的活性,起到止泻抗炎的作用。另一方面能够通过降低ICAM-1的表达来抑制白细胞的过度激活,保护肠道粘膜;并通过促进粘膜上皮细胞的增殖,加强了细胞的增殖和自身修复能力,从而起到对肠上皮细胞的保护作用。

全文目录

中文摘要  3-6
Abstract  6-10
英文缩略词表  10-12
第一部分文献综述  12-36
  文献综述一  12-27
    中医药防治急慢性腹泻的研究进展  12-23
    参考文献  23-27
  文献综述二  27-36
    民族医药野罂粟止泻作用的研究进展  27-34
    参考文献  34-36
第二部分实验研究  36-63
  前言  36-38
  实验一野罂粟水煎剂对腹泻小鼠的行为学及小肠黏膜组织病变的影响  38-44
    1. 材料与方法  38-40
    2. 结果与分析  40-42
    3. 讨论  42-44
  实验二野罂粟水煎剂对小鼠血清中 IL-1β的含量和 TNF-α的表达的影响  44-53
    1. 材料与方法  44-46
    2. 结果与分析  46-48
    3. 讨论  48-53
  实验三野罂粟水煎剂对肠组织中 ICAM-1 和 PCNA 的表达的影响  53-60
    1. 材料与方法  53-54
    2. 结果与分析  54-57
    3. 讨论  57-60
  参考文献  60-63
结语  63-65
致谢  65-66
个人简历  66-67
照片  67-70

野罂粟水煎剂对番泻叶致泻小鼠止泻作用的机理研究

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