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腹腔内移植微载体贴附共培养肝细胞与肝星状细胞治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验研究

作　者: 林建扬
导　师: 刘景丰
学　校: 福建医科大学
专　业: 外科学
关键词: 微载体肝细胞移植肝星状细胞急性肝衰竭共培养
分类号: R575.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的研究大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)与肝实质细胞(hepatocyte,HC)微载体贴附共培养时HSC对HC形态及功能的影响,为体外原代培养肝细胞的营养与支持提供参考。将微载体贴附共培养的肝细胞与HSC移植到D-GalN诱导的急性肝衰竭(acute liver failure, ALF)大鼠腹腔内,评估其对急性肝衰竭大鼠的疗效,为临床应用肝细胞移植及生物人工肝(bioartificial liver, BAL)提供理论依据。方法采用半原位酶分离法灌注分离获得SD大鼠肝细胞,并与大鼠肝星状细胞进行微载体贴附共培养,观察肝细胞的形态及功能改变,确定行肝细胞移植(heptacyte transplantation, HCT)的最佳时期。再将体外共培养的肝细胞与肝星状细胞移植入D-氨基半乳糖诱导形成的急性肝衰竭大鼠模型腹腔内,观察2周内大鼠的存活率,检测肝功能指标,并观察肝脏及腹膜组织学变化。结果每只鼠可分离获得(13.4±4.3)×107个肝细胞,肝细胞活力为89.2%±9.6%。体外培养的肝细胞形态特征及白蛋白、尿素合成等功能可保持7天以上。共培养第3天上清液中白蛋白及尿素浓度最高,LDH最低,与单独培养组比较,差异有显著性(P<0.05)。我们选用体外培养3天的肝细胞或HC/HSC进行HCT。移植2周内HCT组、HSC-HCT组大鼠存活率较ST组明显升高,尤其以HSC-HCT组升高显著,三组之间差异均有显著性(P<0.05)。移植后7天内,HCT组、HSC-HCT组大鼠肝功及凝血均有明显改善,与空载体组比较差异有显著性(P<0.05)。ST组在移植3天后,肝脏病理有继续恶化趋势,而HCT组、HSC-HCT组都有不同程度的恢复。腹膜组织HE染色证实移植入腹腔内的HC或HC/HSC在受体腹腔内存活一周左右。结论微载体培养肝细胞第3天有较好白蛋白及尿素合成功能,且LDH漏出量较低,适合行肝细胞移植。HSC与HC共培养,能更好地发挥肝细胞生物学功能。腹腔内移植微载体贴附培养HC或HC/HSC,都可以对急性肝衰竭大鼠提供代谢支持,可显著改善肝功能、减轻肝脏病理改变,提高急性肝衰竭大鼠的存活率,尤以腹腔内移植微载体贴附HC与HSC效果更佳。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-12
第一部分微载体贴附肝星状细胞与肝细胞共培养对肝细胞生物学特性的影响  12-26
  材料与方法  12-16
  结果  16-20
  讨论  20-22
  照片Ⅰ  22-26
第二部分腹腔内移植微载体贴附共培养肝星状细胞与肝细胞治疗大鼠急性肝衰竭的疗效观察  26-46
  材料与方法  26-29
  结果  29-35
  讨论  35-39
  照片Ⅱ  39-46
全文小结  46-47
参考文献  47-52
致谢  52-53
综述  53-61
综述参考文献  61-66
攻读硕士期间发表文章  66

腹腔内移植微载体贴附共培养肝细胞与肝星状细胞治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验研究

内容摘要

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