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CYP17、CYP19基因多态性与子宫内膜癌易感性的相关性研究

作　者: 李瑞
导　师: 卢爱妮
学　校: 郑州大学
专　业: 妇产科学
关键词: CYP17 CYP19 基因多态性子宫内膜癌
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

背景和目的子宫内膜癌（Endometrial Cancer，简称EC）又称子宫体癌，是女性生殖器官三大恶性肿瘤之一，与子宫颈癌、卵巢癌并称为女性生殖道三大恶性肿瘤，占女性生殖系统恶性肿瘤的20％～30％，其中以子宫内膜样腺癌最常见，约占80％，多见于五十岁以上绝经期或绝经后的妇女，严重威胁老年妇女的健康。其发病率有种族、地区等差异，以北美、北欧发病率最高。自二十世纪六十年代以来，子宫内膜癌发病率逐年上升，且发病年龄有年轻化的趋势，目前子宫内膜癌已超出宫颈癌位居女性肿瘤发病的第十位。子宫内膜癌的病因十分复杂，其发生与长期无对抗的雌激素刺激有关，被认为是雌激素依赖性肿瘤。在对子宫内膜癌发生与雌激素代谢紊乱间的关系进行的大量研究中，已证实雌激素能促进癌灶生长。因此近年来研究认为，雌激素的局部合成和代谢可能在子宫内膜癌的发生和生物学行为中起重要作用。根据流行病学调查及实验研究证实时间、剂量依赖的内、外源性雌激素对子宫内膜的刺激为主要危险因素。雌激素水平升高导致的内膜增生及DNA损伤被认为是子宫内膜癌发生的主要机制，还和高血压、糖尿病、肥胖及绝经后延等有一定关系。激素的合成及代谢是个十分复杂的过程，需要多种酶的参与，基因的多态性影响酶的活性，可以造成个体对肿瘤易感性的差别。子宫内膜癌是雌激素依赖性肿瘤，这些年来，人们试图从与性激素合成有关的代谢酶基因多态性及酶活性改变等方面，探讨子宫内膜癌发生、发展的机制。因此，研究与雌激素代谢及外源性致癌物代谢有关的代谢酶基因的多态性，对了解子宫内膜癌发生、发展的机理，人群易感性的识别及子宫内膜癌的预防和控制都有十分重要的意义。CYP17编码细胞色素P450-17α酶，具有17α-羟化酶和17，20-裂解酶的双重活性，是雌激素合成过程中的限速酶，将孕酮和孕烯醇酮转化为17α羟孕烯醇酮、雄烯二酮、17α羟孕烯醇酮和脱氢表雄酮，进而转化为睾酮、雌二醇、雌酮。所以CYP17在雌激素的生物合成过程中非常重要，也有报道称CYP17为雌激素代谢基因。在CYP17基因启动子区内，位于翻译启始点上游的34对碱基的位置含有一个多态性位点，由于单个碱基（T-C）的替换产生了限制性内切酶MspA1的酶切位点，酶切后产生A1（T）、A2（C）两个等位基因。纯合子基因型Tr（A1／A1）无MspA1酶切位点，仅一条419bp的扩增带；纯合子基因型CC（A2／A2）含有一个酶切位点，被切割为295bp、124bp两个片段；杂合子基因型TC（A1／A2）被切割为419bp、295bp、124bp。CYP19基因编码细胞色素P450芳香化酶（P450arom），是雌激素合成的最后一步限速酶。特定组织中，CYP19基因的表达产物芳香化酶P450的含量、活性及其最终发挥的组织特异性功能各有不同。目前已知的CYP19基因多态性位点有：密码子39（Trp-Arg）多态性、密码子264（Arg-Cys）多态性、408（沉默子）、内含子4中的4核苷酸（TTTA）的串联重复（如重复次数达10次以上称长等位基因，重复次数小于9次者称短等位基因）。当CYP19长等位基因的发生频率升高时，芳香化酶的活性明显增强，这些基因型多同时伴有血中E₂和睾酮的水平升高。本课题主要研究与雌激素代谢及外源性致癌物代谢有关的代谢酶基因CYP17（细胞色素P450 17α酶）、CYP19（细胞色素P450芳香化酶）基因的多态性与子宫内膜癌的易感性的关系，选择能预测子宫内膜癌的良好可靠的指标，并指导临床。对于深入了解子宫内膜癌发生、发展的机理，人群易感性的识别及子宫内膜癌的预防和控制都有十分重要的意义。资料和方法107例正常妇女和104例子宫内膜癌患者来自2004年1月至2006年6月在郑州大学第二附属医院和郑州大学第一附属医院门诊体检和住院的汉族病人，入院第二天清晨抽取肘静脉血2ml，用EDTA-K₂抗凝剂抗凝，放于—80℃的冰箱低温保存。对照组妇女未行任何激素替代治疗，未患过肿瘤性或其他严重的急、慢性疾病。子宫内膜癌组患者均未接受任何放疗、化疗和激素治疗。用DNA提取试剂盒抽提外周血DNA，采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析法，对CYP17（细胞色素P450 17α酶）、CYP19（细胞色素P450芳香化酶）基因进行检测，首先用PCR对CYP17、CYP19基因进行扩增，然后对CYP17基因的扩增产物用限制性内切酶MspA1进行消化，再行经溴化乙锭（EB）染色的2％的琼脂糖凝胶电泳，紫外投射反射仪下根据条带位置确定基因型并摄相保存。CYP17基因-34bp处的T→C碱基置换后产生MspA1酶的酶切位点，因此MspA1酶切扩增产物后，纯合子基因型TT（A1／A1）无MspA1酶切位点，仅一条419bp的扩增带；纯合子基因型CC（A2／A2）含有一个酶切位点，被切割为295bp、124bp两个片段；杂合子基因型TC（A1／A2）被切割为419bp、295bp、124bp。对CYP19基因的扩增产物直接在15％的聚丙稀酰胺凝胶电泳分析，紫外投射反射仪下根据条带位置确定基因型并摄相保存。其有A1-A7个等位基因，从123bp到146bp。计数基因型频率和等位基因频率，进行Hardy—Weinberg平衡法检验样本代表性和卡方检验进行数据分析，当P＜0.05时认为差异有统计学意义。采用SPSS10.0软件进行统计学处理。结果（1）群体代表性检验：按Hardy—Weinberg平衡法检验样本代表性，差异无统计学意义（P＞0.05），样本具有群体代表性；（2） CYP17基因-34bp处T→C碱基置换产生了限制性内切酶MspA1的酶切位点，酶切后产生A1、A2两个等位基因，纯合子基因型TT（A1／A1）无MspA1酶切位点，仪一条419bp的扩增带；纯合子基因型CC（A2／A2）含有一个酶切位点，被切割为295bp、124bp两个片段；杂合子基因型TC（A1／A2）被切割为419bp、295bp、124bp。CYP17各基因型（A1A1，A1A2，A2A2）在EC组的分布为33.7％、53.8％、12.5％，对照组为30.8％、43.9％、25.3％，两组间比较差异有统计学意义（P＜0.01）；（3）含CYP19长等位片段的基因型在子宫内膜癌患者中的分布为75.0％，对照组为53.8％，两组间比较差异有统计学意义（P＜0.01）。结论（1） CYP17基因-34bp处T→C碱基置换在中国汉族人群中比较常见，这种碱基置换在子宫内膜癌（EC）组和对照组有明显差异，其可能是子宫内膜癌的易感基因之一；（2）含CYP19长等位片段（内含子4中的4核苷酸TTTA的串联重复次数达10次以上）的基因型在子宫内膜癌患者中是高表达的，其基因多态性是子宫内膜癌发病的一个基因型危险因素。

全文目录

摘要  3-7
Abstract  7-11
论文部分 CYP17、CYP19 基因多态性与子宫内膜癌易感性的相关性研究  11-31
  前言  11-12
  资料与方法  12-16
  结果  16-20
  讨论  20-25
  小结  25-26
  参考文献  26-31
综述部分代谢酶基因多态性与妇科肿瘤易感性关系  31-45
  参考文献  39-45
附录  45-47
主要英文缩写词索引  47-49
致谢  49

CYP17、CYP19基因多态性与子宫内膜癌易感性的相关性研究

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