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高糖和不同浓度胰岛素对大鼠肝星状细胞活化和增殖影响

作　者: 王刚
导　师: 邓存良
学　校: 泸州医学院
专　业: 内科学
关键词: 肝纤维化 NF-κB 胰岛素肝星状细胞 P65
分类号: R587.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：观察高糖、不同浓度胰岛素对大鼠肝星状细胞(Hepatic Stellate Cell,HSC)增殖、p65蛋白量表达的影响,进一步探讨糖尿病性肝纤维化的发生机制,为临床糖尿病性肝纤维化的治疗提供更佳方案。方法：用不同浓度胰岛素、单纯高糖及高糖加胰岛素作为刺激因子,以甘露醇作为高渗透压对照、5.6mmol/L葡萄糖作为正常对照组,观察体外培养大鼠HSC在不同刺激因子作用下的动态变化。具体每组刺激因子(分组)如下：A：正常糖组(5.6mmol/L)、B：高糖组(25 mmol/L)、C:正常糖(5.6mmol/L)+高胰岛素组(10-6mol/L)、D：高糖(25mmol/L)+高胰岛素组(10-6mol/L)、E:正常糖(5.6mmol/L)+中胰岛素组(10-8mol/L)、F:高糖(25 mmol/L)+中胰岛素组(10-8mol/L)、G:正常糖(5.6mmol/L)+低胰岛素组(10-9mol/L)、H：高糖(25 mmol/L)+低胰岛素组(10-9mol/L)、I：甘露醇组(25mmol/L)。在以上每组刺激因子作用下,大鼠HSC连续外培养24、48、72小时。①在培养24、48、72小时后,通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测HSC的增殖情况并绘制生长曲线。②24小时后用免疫印迹法测定各组HSC p65蛋白量的表达。结果：培养24小时,与A组相比,各组吸光度值变化不大,差异无统计学意义(P>0.05)。48小时后,与A组值相比,C组和E组吸光度值显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),B、C、E、G、H、I组吸光度值没有显著变化,差异无统计学意义(P>0.05)。72小时后,与A组相比,F、G、H、I组吸光度值明显升高,有统计学意义(P<0.05),B、C、D、E组吸光度值无明显变化,无统计学意义(P>0.05)。②免疫印迹法显示：24h时HSC总NF-κBp65蛋白表达INT比值分别为：A组：0.549±0.044；B组：0.893±0.044；C组：1.360±0.038；D组：0.810±0.044；C组：1.036±0.053；F组：0.613±0.040；G组：0.840±0.055；H组：0.846±0.060；I组：0.572±0.032。不同浓度胰岛素、高糖、胰岛素加高糖作用于大鼠HSC后p65蛋白量的表达与正常糖组比较均有统计意义(P<0.01)；C、E、G组p65蛋白量的表达明显增加(P<0.01),单因素分析显示,各组p65蛋白表达量随着胰岛素浓度升高也显著增多,并呈线性相关(P<0.01)；与A组相比,I组p65蛋白量的表达无统计意义(P>0.05)。结论：1、胰岛素、高糖胰岛素加高糖分别可诱导体外培养的大鼠HSC激活,p65蛋白表达的增加,但HSC数目增殖不明显,加入高糖胰岛素后高糖对HSC增殖作用不再增加。2、NF-κB信号通路参与了HSC的激活。

全文目录

1 高糖和不同浓度胰岛素对大鼠肝星状细胞活化和增殖影响  3-47
  1.1 中文摘要  3-5
  1.2 英文摘要  5-8
  1.3 前言  8-10
  1.4 材料与方法  10-22
  1.5 结果  22-34
  1.6 讨论  34-41
  1.7 结论  41-42
  1.8 参考文献  42-46
  1.9 英汉缩略词对照表  46-47
2 致谢  47-48
3 MAPK通路与肝纤维化(综述)  48-58
4 核因子-κB与肝星状细胞活化与凋亡(综述)  58-68

高糖和不同浓度胰岛素对大鼠肝星状细胞活化和增殖影响

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