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何首乌水提物对小鼠黑素瘤细胞黑色素生成影响的研究

作　者: 吴琼
导　师: 何光源；罗杰
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 小鼠B16F1黑素瘤细胞酪氨酸酶黑素何首乌
分类号: R739.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

随着社会的发展,人们越来越追求自身的健康和完美,拥有黑亮的头发是许多人所渴望的,而白发脱发作为影响外表的最常见的原因之一,往往给患者带来精神上的很大烦恼。据文献记载,传统中药何首乌具有乌须发、延年益寿的功效。黑色素产生于皮肤的黑色素细胞,其生物合成过程需多种酶介导,酪氨酸酶是其中重要的酶,它能够将酪氨酸氧化为多巴(DoPA),进一步氧化成多巴醌(DoPA quinone),在别的酶的催化下氧化聚合成黑色素。本文以黑素瘤细胞的学位论文">小鼠B16F1黑素瘤细胞为材料,以不同终浓度的何首乌水提取液处理细胞,分别为0mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml。采用MTT法、体外氧化L-多巴反应法、NaOH法分别检测其对细胞增殖、细胞中酪氨酸酶活性、细胞中黑素生成量的影响;采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法检测其对细胞中酪氨酸酶基因、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-l)基因、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)基因及MITF基因mRNA表达的影响;采用Western blot免疫印迹法检测其对上述四种基因的蛋白质表达的影响。研究发现,何首乌水提取物能够激活B16F1黑素瘤细胞中酪氨酸酶的活性,并增加黑色素的合成量,同时还具有促进黑素细胞增殖的作用。何首乌水提取物可以提高上述黑色素合成相关的四种基因及其蛋白质的表达量。而且,从结果可以看出,在0—1mg/ml的浓度范围内,随着何首乌水提取物浓度增大,细胞增殖、酪氨酸酶的活性和基因表达、蛋白质表达也会随之上调。通过实验我们发现:何首乌水提液促进黑素瘤细胞生成黑素作用的可能机制之一是它能够在基因转录和翻译水平促进黑素合成相关基因mRNA的表达。本文运用水提法提取何首乌中乌发有效成分,从细胞和分子水平验证何首乌乌发的作用机理。为深入探讨何首乌的促黑素生成功能及更详细的机理、进一步研究何首乌的药理提供了理论基础。为传统中药的现代化功效评价提供了有力的参考证据。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
1 绪论  9-22
  1.1 白发发生的原因  9-11
  1.2 中草药在乌发中的应用  11
  1.3 何首乌的有效成分和功用  11-15
  1.4 黑素细胞及黑素的生成与调节  15-20
  1.5 本课题的研究内容和意义  20-22
2 何首乌水提液的提取  22-25
  2.1 实验材料  22
  2.2 实验仪器  22
  2.3 提取方法  22-23
  2.4 结果与讨论  23-25
3 何首乌水提液对B16F1 细胞增殖的影响  25-34
  3.1 实验材料与试剂  25-26
  3.2 MTT 法原理  26-27
  3.3 小鼠B16F1 黑素瘤细胞培养  27-28
  3.4 MTT 法检测小鼠B16F1 黑素瘤细胞细胞增殖率  28-29
  3.5 结果与讨论  29-34
4 何首乌水提液对B16F1 细胞中酪氨酸酶活性影响的研究  34-36
  4.1 材料与仪器  34
  4.2 实验方法  34-35
  4.3 结果与讨论  35-36
5 何首乌水提液对B16F1 细胞中黑素生成影响的研究  36-39
  5.1 材料与试剂  36
  5.2 实验方法  36-37
  5.3 结果与讨论  37-39
6 何首乌水提液对B16F1 黑素瘤细胞中黑色素合成相关基因mRNA 表达及蛋白质生成的影响  39-50
  6.1 实验材料与试剂  39-40
  6.2 实验方法  40-46
  6.3 结果与讨论  46-50
7 总结和展望  50-53
  7.1 总结  50-51
  7.2 展望  51-53
致谢  53-55
参考文献  55-58
附录1 攻读硕士学位期间发表的学术论文  58

何首乌水提物对小鼠黑素瘤细胞黑色素生成影响的研究

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