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第一部分黄体酮对大鼠SAH后EBI神经保护作用的实验研究目的:应用SAH后EBI模型,探讨黄体酮对大鼠SAH后EBI是否具有神经保护作用。方法:60只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组(n=12),SAH组(n=12)和黄体酮治疗组,黄体酮治疗组又分为4mg/kg/d,16mg/kg/d,32mg/kg/d三个亚组(每个亚组n=12)。应用视交叉前池一次注血法制成SAH后EBI模型,在蛛网膜下腔出血后1h, 6h,和24h分别腹腔注射黄体酮,48小时后处死大鼠,取颞底皮层脑组织做标本,测定脑水肿变化及血脑屏障变化;同时观察SD大鼠行为功能变化,进行神经功能评分,探讨黄体酮对SAH后EBI是否具有神经保护作用。结果:与对照组相比,SAH组大鼠神经认知功能明显降低,食欲及活动能力明显降低,脑组织含水量明显增加,48h时水肿百分数达到81.92%,血脑屏障破坏明显,48h时测定皮层脑组织EB含量达到18.2 ng/mg;与SAH组相比,16mg/kg/d剂量黄体酮治疗后大鼠神经功能明显改善,脑水肿指数降低,48h时水肿百分数80.54%,血脑屏障功能改善,48h时测定皮层脑组织EB含量12.4ng/mg;低剂量组与SAH组相比改善不明显,高剂量组与中等剂量黄体酮组相比改善不明显。结论:1.通过构建大鼠SAH模型,能够观察到大鼠SAH后48h神经认知功能明显降低,脑组织水含量增加明显,血脑屏障破坏明显,说明SAH后存在EBI。2.应用中等剂量黄体酮治疗后,能有效降低SAH后脑水肿、改善血脑屏障,改善神经认知功能,提示黄体酮对大鼠SAH后EBI具有神经保护作用。第二部分黄体酮对大鼠SAH后大脑皮层TLR4(Toll样受体4)/NF-κB(核因子-κB)传导通路的调控作用目的:研究SAH后大脑皮层TLR4/NF-κB传导通路及其下游炎症因子及细胞活素的表达变化及黄体酮对TLR4/NF-κB传导通路的干预作用,探讨黄体酮对SAH后EBI神经保护作用机制。方法:24只健康成年雄性SD大鼠随机分为:对照组(n=6), SAH组(n=6), SAH+安慰剂组(n=6)和SAH+黄体酮治疗组(n=6)。采用立体定向注射技术,构建视交叉前池一次注血SAH模型,对照组开骨窗但不注入动脉血,黄体酮治疗组给予黄体酮注射治疗,每次注射剂量16 mg/kg,在SAH后1h、6h、24h分别腹腔注射,共注射3次。安慰剂组注射等容量溶剂,溶剂为2-羟丙基-β-环糊精。48小时后处死大鼠,取颞底皮层脑组织做标本,采用Western blot法测定TLR4、NF-κB、ICAM-1(细胞间粘附因子-1)及MCP-1(单细胞趋化蛋白-1)表达情况;免疫组化法检测TLR4、NF-κB及MCP-1表达。结果:Western blot结果显示对照组TLR4, NF-κB, ICAM-1,和MCP-1蛋白水平较弱;与对照组相比,SAH组TLR4, NF-κB, ICAM-1和MCP-1蛋白水平明显增高(P <0.01);SAH组与安慰剂组对比无明显差异(P >0.05);黄体酮治疗组中TLR4, NF-κB, ICAM-1,和MCP-1蛋白水平明显低于安慰剂组(P <0.01)。免疫组化(TLR4, NF-κB,和MCP-1蛋白免疫反应性主要在神经元细胞及小角质细胞,细胞核棕色黄染代表阳性)结果显示对照组TLR4, NF-κB,和MCP-1阳性率较低;与对照组相比,SAH组TLR4, NF-κB,和MCP-1阳性率明显增高(P <0.01);SAH组与安慰剂组对比无明显差异(P >0.05);黄体酮治疗组中TLR4, NF-κB,和MCP-1阳性率低于SAH组及安慰剂组(P <0.01)。结论:SAH后早期能激活TLR4/NF-κB传导通路,激活其下游的细胞活素/趋化因子诱导炎症反应,可能是引起SAH后EBI的重要机制,黄体酮可能通过抑制此传导通路,减轻免疫炎症,从而对SAH后EBI起到神经保护作用。
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