学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

三种赤眼蜂proPO-AS活性及免疫活性研究

作　者: 马晓慧
导　师: 丛斌
学　校: 沈阳农业大学
专　业: 农业昆虫与害虫防治
关键词: 松毛虫赤眼蜂螟黄赤眼蜂玉米螟赤眼蜂酚氧化酶 Wolbachia
分类号: S476.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 22次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

赤眼蜂Trichogramma spp是目前广泛应用的天敌昆虫,通过人工水平转染微生物沃尔巴克氏体,可诱导两性生殖的赤眼蜂改变其固有生殖方式,由两性生殖转变为产雌孤雌生殖,增加雌蜂比例,降低应用成本。鉴于昆虫体内酚氧化酶原激活系统(prophenoloxidase- activating system, proPO-AS)在抵御异源物入侵、伤口愈合等重要生理反应中发挥重要作用,是昆虫最重要的体液免疫系统,而在赤眼蜂种间人工传递Wolbachia能否成功,可能与受体赤眼蜂自身proPO-AS活性大小有关。为探讨两者的相关性,明确赤眼蜂酚氧化酶特性,了解不同赤眼蜂种间免疫能力及对微生物Wolbachia免疫力差异原因,本研究以松毛虫赤眼蜂(Trichogramma dendrolimi)、螟黄赤眼蜂(Trichogramma chilonis)、玉米螟赤眼蜂(Trichogramma ostriniae)为对象,开展了以下研究：1.在28℃条件下,以邻苯二酚为底物,设定不同pH值缓冲液的酶反应体系,测定3种赤眼蜂酚氧化酶的最适pH值；设定温度梯度,测定酶的最适温度；采用邻苯二酚、L-多巴、焦性没食子酸为底物,测定酶的底物专一性。结果表明,3种赤眼蜂酚氧化酶活性的最适pH值为4.5～5.0,强酸和碱性环境强烈影响酶的活性；松毛虫赤眼蜂和螟黄赤眼蜂酚氧化酶活性的最适温度为40℃,玉米螟赤眼蜂的最适温度为37℃,高温强烈抑制赤眼蜂酚氧化酶活性,可使酶迅速失活；3种赤眼蜂对邻苯二酚和L-多巴反应的Km值均较小,两者没有显著差异,与焦性没食子酸反应的Km值较大,表明三种赤眼蜂对邻苯二酚和L-多巴的亲和力较高。2.以3种供试赤眼蜂为对象,研究几种化学因子(Ca2+、昆布多糖、纤维素、右旋糖酐、脂多糖和丝氨酸蛋白酶抑制剂)对供试赤眼蜂匀浆液中proPO-AS的激活程度,分别测定PO活性值。结果表明,3种赤眼蜂匀浆液中proPO-AS的激活需要Ca2+的参与,在Ca2+浓度为0.03 mol/L时激活作用达到最大值；Ca2+和PMSF加样顺序不同会影响PO活性,在玉米螟赤眼蜂匀浆液中先加入Ca2+,后加入PMSF,可明显抑制PO活性(P<0.05),而先加PMSF后加Ca2+,则不表现上述的抑制作用。4种葡聚糖对赤眼蜂匀浆液proPO-AS的激活,其中昆布多糖和脂多糖能显著的增强PO活性,而纤维素和右旋糖苷对PO活性的作用均显著低于对照。表明不同类型的葡聚糖对proPO-AS且有完全不同的激活作用,即赤眼蜂proPO-AS对不同类型的葡聚糖可做出选择性反应。3.设定相同寄主赤眼蜂、不同寄主赤眼蜂、同寄主不同虫态以及不同生殖方式的赤眼蜂,测定其对Wolbachia菌悬液的免疫活性,寻求免疫能力较低的特定虫态的蜂种,为Wolbachia在赤眼蜂间的人工转染技术提供理论依据。结果表明,其免疫活力依次为：玉米螟赤眼蜂>螟黄赤眼蜂>松毛虫赤眼蜂；寄主为米蛾或柞蚕的两种赤眼蜂对Wolbachia的免疫能力无显著差异(P<0.05)；研究证实,赤眼蜂蛹的PO活性值显著低于赤眼蜂成虫(P<0.05),以松毛虫赤眼蜂为最；对于不同生殖方式蜂种,人工转染Wobachia至赤眼蜂体内共生后,降低了对Wolbachia菌悬液的免疫活性,其具体机理尚不明确。4. Wolbachia细菌细胞表面脂多糖LPS为敏感信号分子,赤眼蜂体内存在特定蛋白识别该分子。本研究采用昆布多糖沉淀法,分离3种赤眼蜂的识别分子-脂多糖结合蛋白,经SDS-PAGE电泳后检测,测定沉淀后的粗提液PO活性。通过此法获得的3种赤眼蜂粗提液蛋白分子量约在40 kD左右,但电泳背景较重,主带不够明晰。经昆布多糖沉淀后的粗提液可以被钙离子激活,表明离心未能完全沉淀脂多糖结合的蛋白。需要完善提取蛋白的方法,以获得明晰的蛋白主带。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
第一章前言  10-22
  1.1 沃尔巴克氏体研究概述  10-15
  1.2 昆虫酚氧化酶原激活系统的研究简述  15-20
  1.3 本研究的立题依据及创新点  20-22
第二章赤眼蜂酚氧化酶学特征的初步探讨  22-28
  2.1 材料与方法  22-24
  2.2 结果与分析  24-26
  2.3 讨论  26-28
第三章几种化学因子对三种赤眼蜂酚氧化酶活性的影响  28-33
  3.1 材料与方法  28-29
  3.2 结果与分析  29-31
  3.3 讨论  31-33
第四章微生物Wolbachia菌悬液对三种赤眼蜂酚氧化酶活性的影响  33-39
  4.1 材料与方法  33-34
  4.2 结果与分析  34-37
  4.3 讨论  37-39
第五章脂多糖结合蛋白的分离及对Wolbachia的免疫活性  39-44
  5.1 材料与方法  39-40
  5.2 结果与分析  40-42
  5.3 讨论  42-44
第六章结论与讨论  44-46
参考文献  46-58
致谢  58-59
攻读学位论文期间发表文章  59

三种赤眼蜂proPO-AS活性及免疫活性研究

内容摘要

全文目录

相似论文