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骨膦脂质体的制备及诱导巨噬细胞凋亡的初步研究

作　者: 刘福青
导　师: 冯永堂；徐志伟
学　校: 潍坊医学院
专　业: 免疫学
关键词: 骨膦骨膦脂质体抗单链DNA抗体巨噬细胞凋亡
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

目的利用薄膜法制备携带骨膦药物的载体—脂质体，初步探讨骨膦脂质体诱导巨噬细胞凋亡的作用，为有关巨噬细胞的功能研究及临床相关疾病的治疗，提供新的技术方法和实验论据。方法本试验包括(一)骨膦脂质体的制备：先利用旋转蒸发仪，将溶解卵磷脂和胆固醇的氯仿，负压条件下旋转蒸发去除，在瓶的内壁上形成一层薄膜即脂质体。然后分别加入不同的液体(PBS液、骨膦液)，低速旋转溶下瓶壁上的脂质体，分别制备出空脂质体和骨膦脂质体。(二)用骨膦脂质体在小鼠体外、体内不同时间段分别作用腹腔巨噬细胞，然后用抗单链DNA抗体对凋亡的巨噬细胞进行免疫组化染色，用琼脂糖凝胶电泳技术对凋亡的巨噬细胞DNA进行梯状带检测，对比观察和分析不同时间巨噬细胞凋亡的规律。结果 (1) 利用薄膜法制备的脂质体能够包封骨膦药物，且能够将骨膦导入巨噬细胞并诱导相应细胞发生凋亡。(2) 骨膦脂质体作用体外的腹腔巨噬细胞不同时间段的免疫组化染色。结果显示：0小时未发现凋亡细胞，3小时可见巨噬细胞凋亡，凋亡的细胞核呈现深棕黄色，未凋亡的巨噬细胞的细胞核呈现蓝色，凋亡阳性及凋亡阴性的着色特征与胸腺细胞模型凋亡染色结果一致。0、3、12、24小时凋亡率分别为0、26％、32％、43％。(3) 骨膦脂质体小鼠腹腔内注射，作用腹腔巨噬细胞0、3、12、24小时的染色结果显示：在0小时未看到腹腔巨噬细胞的凋亡现象，在3小时可出现凋亡，在0、3、12、24小时的凋亡率分别为0、20％、75％、100％。随着骨膦脂质体作用时间的延长，细胞凋亡率逐渐升高，变化规律与体外诱导的凋亡结果一致。(4) 骨膦脂质体体外作用腹腔巨噬细胞0、3、12、24小时，抽提细胞的DNA，经琼脂糖凝胶电泳结果显示：作用3小时看到特征性的梯状带，作用24小时出现的梯状带更加清晰。梯状带先后出现的规律变化与凋亡细胞染色结果相符。结论 (1) 利用薄膜法可以制备能够包封骨膦药物的脂质体。(2) 骨膦脂质体体内、外作用于腹腔巨噬细胞可诱导巨噬细胞凋亡。(3) 随着骨膦脂质体作用腹腔巨噬细胞的时间延长，凋亡细胞数目逐渐增加，骨膦脂质体的作用时间与凋亡细胞

骨膦脂质体的制备及诱导巨噬细胞凋亡的初步研究

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