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紫球藻的廉价培养及藻红蛋白纯化的研究

作　者: 陈伟平
导　师: 陈必链
学　校: 福建师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 紫球藻复合肥细胞破碎藻红蛋白膜分离
分类号: Q943.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

紫球藻（Porphyridium cruentum）属于红藻门的一种单细胞藻,能合成大量的藻红蛋白和胞外多糖等有效活性物质,具有广阔的应用前景。海藻的培养成本以及藻红蛋白等大分子纯化费用已成为藻红蛋白（B-PE）在医药和工业领域大量需求的重要制约因素。本论文从紫球藻（Porphyridium cruentum）的廉价培养,不同细胞破碎方法筛选,藻红蛋白规模纯化进行较系统的研究。主要实验结果如下:以细胞干重、藻红蛋白为目标产物,对复合肥培养基进行筛选优化。摇瓶培养所获得的复合肥培养基配方Ⅱ、Ⅲ培养紫球藻,获得细胞干重（1.077±0.175 g/L、0.920±0.017 g/L）均高于KOCH培养基培养所获得的细胞干重（0.823±0.160g/L）。平板式光生物反应器验证培养发现,复合肥Ⅱ培养基细胞干重均大于KOCH培养体系相应的干重,差异显著（P＜0.05）。复合肥Ⅱ培养藻红蛋白的含量高于KOCH培养对应的含量,差异极显著（P＜0.01）。以复合肥Ⅱ培养基进行平板式光生物反应器规模培养,与补充新鲜培养液相比,利用NaHCO₃和尿素进行补料培养紫球藻所合成的代谢产物含量有所增加。且当采用NaHCO₃进行补料培养时,紫球藻的细胞干重为最高（1.37±0.12 g/L）,同样获得最高的藻红蛋白含量,与对照组相比具有极显著差异（P＜0.01）。培养液回收利用实验发现,当回收培养液更新率为25%时,所构成的培养液对紫球藻生长有促进作用,培养液中藻红蛋白含量均高于其他培养体系,50%、75%等更新率的培养体系中藻红蛋白含量均比对照组低,且25%更新率所获得的藻红蛋白及多糖含量均显著差异于对照组（P＜0.05）。采用溶胀法、反复冻融法、低浓度氯化钙溶液提取法和玻璃珠处理法等方法分别对紫球藻、蔷薇藻和念珠藻细胞破碎,通过测定藻红蛋白的纯度和浓度对四种细胞破碎方法效果进行比较。当细胞密度为1.000g/L时,采用反复冻融法处理紫球藻和蔷薇藻时能够获得最高的藻红蛋白纯度(OD₅₄₅/OD₂₈₀),分别为1.250和1.669,藻红蛋白的浓度分别为29.788 mg/L和36.026 mg/L,细胞密度对藻红蛋白纯度影响较小;低浓度氯化钙溶液提取法能使念珠藻藻红蛋白的纯度(OD₅₄₅/OD₂₈₀)达到0.477。表明紫球藻和蔷薇藻经反复冻融法破碎细胞,藻红蛋白纯度高,提取效果好;而对念珠藻藻红蛋白提纯采用低浓度氯化钙溶液提取法效果好。对紫球藻藻红蛋白膜分离工艺进行优化,采用的超滤柱膜截留分子量为60～80kDa,当压力为0.06 MPa、处理温度45℃、pH 10时进行紫球藻藻红蛋白的膜分离提纯效果最佳,回收的藻红蛋白提取液进行4℃条件下硫酸铵沉淀实验,先经过15%（NH₄）₂SO₄过夜沉淀,再经过60%（NH₄）₂SO₄处理7 d,最终获得的藻红蛋白总收率为52.09%,纯度可达到4.29。

全文目录

摘要  2-4
Abstract  4-6
中文文摘  6-11
第1章绪论  11-31
  1.1 前言  11-13
  1.2 紫球藻研究进展  13-25
    1.2.1 紫球藻分类、形态及生长繁殖  13-14
    1.2.2 紫球藻合成的生物活性物质  14-22
    1.2.3 紫球藻的培养条件  22-25
  1.3 海藻的廉价规模培养  25-30
    1.3.1 海藻的廉价规模培养  25-28
    1.3.2 海藻廉价培养  28-30
  1.4 研究目的与意义  30-31
第2章农业化肥培养紫球藻的应用研究  31-45
  2.1 引言  31-32
  2.2 材料与方法  32-36
    2.2.1 材料  32-35
    2.2.2 方法  35-36
  2.3 结果与分析  36-41
    2.3.1 标准曲线的绘制  36
    2.3.2 初筛培养基中紫球藻生长状况  36-37
    2.3.3 补料培养对紫球藻生长的影响  37-38
    2.3.4 不同培养基对紫球藻摇瓶培养生长的影响  38-39
    2.3.5 紫球藻细胞形态观察  39-40
    2.3.6 光生物反应器紫球藻分批培养  40-41
    2.3.7 培养基组成对紫球藻胞外多糖含量的影响  41
  2.4 讨论  41-42
  2.5 小结  42-45
第3章紫球藻工业化廉价培养应用研究  45-55
  3.1 引言  45
  3.2 材料与方法  45-48
    3.2.1 材料  45-47
    3.2.2 方法  47-48
  3.3 结果与分析  48-53
    3.3.1 不同补料方式对紫球藻生长的影响  48-51
    3.3.2 培养液更新率变化对紫球藻生长的影响  51-53
  3.4 讨论  53-54
  3.5 小结  54-55
第4章微藻细胞破碎方法的比较研究  55-65
  4.1 引言  55
  4.2 材料与方法  55-57
    4.2.1 材料  55-57
    4.2.2 方法  57
  4.3 结果与分析  57-61
    4.3.1 溶胀法破碎细胞  57-58
    4.3.2 反复冻融法破碎细胞  58-59
    4.3.3 低浓度氯化钙溶液提取法破碎细胞  59-61
    4.3.4 玻璃珠处理法破碎细胞  61
  4.4 讨论  61-63
  4.5 小结  63-65
第5章膜分离技术在紫球藻藻红蛋白纯化中的应用  65-73
  5.1 引言  65
  5.2 材料与方法  65-67
    5.2.1 材料  65-66
    5.2.2 方法  66-67
  5.3 结果与分析  67-69
    5.3.1 不同操作压力对超滤效果的影响  67-68
    5.3.2 不同温度对超滤效果的影响  68-69
    5.3.3 pH对超滤的影响  69
    5.3.4 硫酸铵沉淀进行藻红蛋白的纯化  69
  5.4 讨论  69-71
  5.5 小结  71-73
结论与展望  73-75
参考文献  75-85
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果  85-87
致谢  87-89
个人简历  89-91

紫球藻的廉价培养及藻红蛋白纯化的研究

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